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第一节概述 　　把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体。 　　质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超

一、植物DNA的提取原理 利用基因组DNA较长的特性，可以将其于细胞器或质粒等小分子DNA分离。当加入一定量的异丙醇或乙醇，基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团漂浮其中，可用玻璃棒将其取出，而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部，从而达到分离提取的目的。分离基因组D

一、原理 质粒（plasmid）是一种染色体外的稳定遗传因子，大小从1~200kb不等，为双链、闭环的DNA分子，并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制和转录能力，能在子代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。质粒在细胞

一、原理 DNA和RNA在真核生物体内都是以蛋白质复合物的形式存在的。动植物组织中的DNA－蛋白质复合物可溶于水或高盐溶液（1M的氯化钠），而微溶于0.14M的盐溶液中；RNA－蛋白质复合物则易溶于0.14M的盐溶液中。利用这一性质，通过离心可将DNA－蛋白质复合物与RNA－蛋

一、原理 质粒DNA的提取有多种方法，目前常用的有碱变性法、煮沸裂解法、羟基磷灰石柱层析法、酸酚法、两相法、氯化铯－溴化乙锭密度梯度离心法等。本实验采用碱裂解法，其原理是在pH高于12.6的情况下，染色体DNA的氢键断裂，导致双螺旋结构解开而变性，而闭环的质粒DNA由于处于拓扑

一、原理 l噬菌体DNA作为一种基因工程载体，在组建动植物基因组DNA和cDNA文库方面具有重要用途。lDNA通常被包在一个蛋白质外壳中。蛋白质外壳经链霉蛋白酶（或蛋白酶K）和SDS处理后，发生解体和变性，最后可通过苯酚抽提和离心被去除。保留在水相中的DNA可经乙醇或异戊醇沉淀

一、原理 球状蛋白质一般都可以在低盐溶液或蒸馏水表面形成不溶解的变性薄膜，若浓度合适，则肽链伸展形成蛋白质单分子层。一般用碱性蛋白质包围带负电的核酸分子，当蛋白质展开时，核酸也随之展开，核酸的形态结构将保持一定的完整性。然后将核酸分子捞到支持膜上，经过负染色，就可以在电镜下观察

一、原理 l噬菌体是一种温和性噬菌体，可以进行裂解性和溶源性生长。当噬菌体感染宿主菌时，它的DNA注入宿主菌细胞，外壳蛋白留在外面，在进行裂解性生长时，它的基因组在宿主细胞内经过复制和重新包装后形成新的噬菌体颗粒，并使宿主细胞裂解；在进行溶源性生长时，它的DNA整合到宿主菌的染

用牙签从琼脂培养基上挑取的菌落可直接用于质粒DNA.所得的闭合环状DNA往往杂志太多，不能作为大多数限制酶的底物。但是，牙签法也有很多用途，例如，它可用来鉴定转化后重组质粒的克隆，用来估计转座子中质粒的大小，用来比较在相同宿主中不同质粒拷贝数的多少。待测重组子中插入的片段的性质可

核酸的分离与提取是分子生物学研究中最重要的基本技术之一，核酸样品的质量将直接关系到实验的成败。 核酸分离提取的原则 核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都以与蛋白质结合的状态存在。真核生物的染色体DNA为双链线性分子，原核生物的“染色体”、质粒及真核细胞器DNA为双链环状