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基因组DNA的提取(有机溶剂提取法和Chelex-100提取法)
生物性检材的DNA 分离是DNA 分型的第一步,是保证后期实验成功与否的关键环节。 DNA 存在于细胞内,首先利用各种方法(高渗或低渗法)破坏细胞的完整结构,通过离心收集细胞核,在蛋白酶K、SDS 作用下,消化破裂细胞膜与核膜,核蛋白变性并降解,使 DNA 从核蛋白中游离出来,然
2010-04-03
DNA定量测定(分光光度法和凝胶电泳法)
法医物证检材多种多样,受外界影响千差万别,从中提取的DNA 量也各不相同。因此,在进行DNA 分析前,对样品提取的DNA 的定量分析是十分必要的。 方法一:分光光度法 【实验原理】 分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光源透过
2010-04-03
小牛胸腺DNA的制备(浓盐法)
实验原理: DNA在生物体内是以与蛋白质形成复合物的形式存在的,因此提取出脱氧核糖核酸蛋白复合物(DNP)后,必须将其中的蛋白质除去。小牛胸腺,鱼类精子和植物种子的胚等含有丰富的DNA,可作为提取DNA的良好材料。动物和植物组织的脱氧核糖核蛋白可溶于水或浓盐溶液(如1mol/L
2010-04-05
植物DNA的提取
实验原理 本实验介绍的就是一种快速简便提取植物总DNA的方法:先将新鲜的叶片在液氮中研磨,以机械力破碎细胞壁,然后加入十六烷三甲基溴化铵(简称CTBA,是一种阳离子去污剂)分离缓冲液,使细胞膜破裂,同时将核酸与植物多糖等杂质分开。再经氯仿-异戊醇提取去除蛋白,即可得到适合于酶切
2010-04-05
动物组织细胞基因组DNA提取
一、实验原理 真核生物的一切有核细胞(包括培养细胞)都能用来制备基因组 DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内,因此,制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基
2010-04-05
柱离心法纯化质粒DNA
一、实验目的 ·学习柱离心法纯化质粒DNA 二、实验原理 ·离心柱结构:特殊硅基质吸附材料,特异性吸附DNA,而RNA与蛋白质穿过。 在正常情况下,核酸表面覆盖了一层由水分子组成的亲水薄膜,以维持其水溶性。高浓度盐离子的加入破坏了核酸表面亲水薄膜的相对有序排列,形成了疏水
2010-04-06
拟南芥基因组DNA的分离提取
【实验目的】 F 掌握拟南芥基因组DNA的抽提原理和方法。 【实验原理】 通常采用机械研磨的方法破碎拟南芥的组织和细胞,由于拟南芥细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响,在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在
2010-04-06
质粒的提取和电泳检测
相关知识 质粒(Plasmid) :独立于染色体外的,能自主复制且稳定遗传的遗传因子。是一种环状的双链DNA分子。存在于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中,在细菌细胞中最多。 蓝白斑筛选: 现在常用的质粒载体上都带有β-半乳糖激酶(LacZ)基因。载体上重组DNA的插入
2010-04-10
质粒DNA提取及浓度纯度测定
[实验原理] 质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小在1—200Kb之间,是具有双链闭合环状结构的DNA分子,主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。质粒具有复制和控制机构,能够在细胞质中独立自主地进行自身复制,并使子代细胞保持它们恒定的拷贝数。从细胞生存来看,没
2010-04-21
碱裂解法提取质粒DNA实验原理和操作步骤
实验原理 碱裂解法是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法,碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条
2010-04-22
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