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物种的遗传多样性在本质上是DNA 一级序列的多样性。近年来，随着DNA 测序技术的迅速发展和日益普及，DNA 测序在遗传多样性的研究中正在起着越来越大的作用。本章将介绍目前在遗传多样性研究中常用的一种手动和一种全自动双链DNA 测序方法。 1.DNA 模板的制备 在遗传多样性

尽管核酸序列测定方法越来越成熟、简便并且可以自动化，但事实上，对于一个片段较长、序列未知的待测核酸而言，仍然是一件耗时且繁琐的工作。对于一个待测DNA分子，要制定一个能够简捷准确的测定方案，一般可以从以下几个方面考虑： ⑴ DNA片段大小。 ⑵ 背景资料：是否清楚DNA限制性

[实验原理] 测定DNA的核苷酸序列是分析基因结构与功能关系的前提。从小片段重叠法到加减法、双脱氧链终止法、化学降解法、自动测序，DNA测序技术发展很快。目前在实验室手工测序常用Sanger双脱氧链终止法。Sanger法就是使用DNA聚合酶和双脱氧链终止物测定DNA核苷酸序列的

DNA序列的正确测定，是进行基因结构和功能分析，绘制基因图谱、转基因检测等方面工作的重要前提。同时DNA测序技术为快速、简捷分析蛋白序列及结构提供了工具。 DNA序列测定技术是在DNA内切酶、合成酶的应用，基因克隆及亚克隆技术，高分辨率聚丙烯酰胺变性胶电泳技术等基础上建立起来的

[实验原理] DNA 测序（DNA sequencing）是对DNA 分子的一级结构的分析。其基本原理是DNA 的复制反应体系中需要存在DNA 聚合酶、DNA 模板、寡核苷酸引物和dNTP，引物和模板退火形成双链后，DNA 聚合酶在引物的引导下在模板链上沿3’→5’的方向移动，

准备： 1．灭菌 试管 400毫升细长烧杯2瓶，离心瓶4-6个（250ml）。 2．试剂：YEP 1200ml（每瓶300ml 共4瓶） Kan 1;1000，Rif1:500。 1/2MS 2%蔗糖（灭菌115度20分钟），Silwet在-20℃贮存。 3．步骤： 共

一．农杆菌感受态细胞的制备 （同大肠杆菌质粒DNA的提取），然后将其转化大肠杆菌，再提取大肠杆菌的质粒DNA进行酶切鉴定。 取-70℃保存的EHA105于含有50μg/ml链霉素平板划线，28℃培养2天。挑单菌落接种于5ml YM（0.5g/L KH2 PO4 ,10 g/L

1997年2月22日，英国罗斯林研究所的研究人员向公众宣布，经过几个月的精心呵护，他们用体细胞克隆技术培育出来的小绵羊“多利”正在茁壮成长。5天后，也就是2月27日，英国《自然》杂志全文刊登了罗斯林研究所的实验结果。这一消息震惊了世界，人们在措手不及之中迎来了克隆时代。 在中国

1．感受态的制备 （1）接种单菌落于2ml LB培养液中，37℃过夜。 （2）取0.25ml过夜菌入25ml LB培养液中，37℃振摇4～6h至A590=0.4～0.6。 （3）倒入50ml管内，水浴10min，以2500～3000rpm离心5min，弃上清。 （4）缓慢

1、低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好，平端连接需要过夜反应。 2、在体系中加一点切载体的酶，只要连接后原来的酶切位点消失。这样可避免载体自连，应该可以大大提高平端连接的效率。 足够多的载体和插入片段是最重要的 。要看片段具体情况而言，有时载体和片段浓度过高，容易产