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聚乙二醇制备质粒方法(PEG Preparation of Plasmid DNA)
Plasmid DNA isolated by this procedure can be used routinely for electrophoretic analysis, restriction endonuclease digestion and transforma
2010-01-14
重组质粒的筛选方法原理与步骤
重组DNA转化受体细胞后,须在不同水平上进行筛选,以区别转化子与非转化子、重组子与非重组子以及鉴定所需的特异性重组子。在转化过程中,并非每个受体细胞都被转化;即使获得转化细胞,也并非都含有目的基因,所以需采用有效方法进行筛选。筛选的方法包括根据遗传表型筛选、限制性内切酶分析筛选、
2010-01-14
碱裂解法制备质粒DNA(Alkaline Lysis Plasmid Prep)
Alkaline lysis miniprep 1. Grow bacteria overnight in 37℃shaking incubator, with lids very loose and taped on. I normally use 5 ml of liqui
2010-01-14
分子诊断技术前景、应用及存在问题
分子诊断技术在检验医学的基础和临床研究中显示出强大的优势,例如,在乙型肝炎的诊断和治疗中,应用DNA定量技术为乙型肝炎的治疗和预后监测提供了重要依据,但近近不无症状乙型肝炎表面抗原携带者及乙型肝炎表面抗阴性者的人群中检出了前C终止密码子变异(G1896A)。研究表明,突变将导致乙
2010-01-14
受体菌感受态细胞的制备原理、方法与步骤
一、目的与原理 当细菌处于容易吸收外源DNA的状态时,即为感受态,而用理化手段使细菌处于感受态的操作为致敏过程。感受态细胞制备是重组基因能否实现转化的一个重要的技术环节。本试验是通过钙离子来诱导使之成为感受态细胞。 二、材料和方法 1. 材料:大肠杆菌 2. 仪器: 离
2010-01-14
植物基因分离的图位克隆(定位克隆)技术主要步骤
定位克隆(positoinal cloning),又称图位克隆(map-based clonig),1986年首先由剑桥大学的Alan Coulson提出。用该方法分离基因是根据功能基因在基因组中都有相对较稳定的基因座,在利用分离群体的遗传连锁分析或染色体异常将基因伫到染色体的1
2010-01-14
转染常用的报告基因(reporter gene)列举
报告基因(reporter gene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因,或与其它目的基因相融合,在调控序列控制下进行表达,从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控,筛选得到转化体。
2010-01-14
煮沸法小量提取质粒的原理、步骤和注意事项
试验原理: 煮沸法是根据Holmex和Quigley(1985)的方法改进而成的。在基因工程中, DNA 分子的切割是由限制性内切酶来完成的。限制性内切酶能识别特定的 DNA 序列,在一定的条件下切断双链 DNA 。限制性内切酶的作用效率是受多方面因素影响的,如反应温度,缓冲体
2010-01-14
DNA微阵列技术(microarray)介绍及其应用
DNA微阵列技术(microarray)指在固体表面(玻璃片或尼龙膜)上固定成千上万DNA克隆片段,人工合成的寡核苷酸片段,用荧光或其他标记的mRNA,cDNA或基因组DNA探针进行杂交,从而同时快速检测多个基因表达状况或发现新基因,快速检测DNA序列突变,绘制SNP遗传连锁图,
2010-01-14
肿瘤标志物分类、检测原理和检测方法
根据WHO资料,全球范围内恶性肿瘤是人类仅次于心脑血管病的第二大死亡原因,占总死亡人数的22%,并逐年增加。 10种常见肿瘤:胃癌、肝癌、食管癌、结直肠肛门癌、白血病、子宫颈癌、鼻咽癌、乳腺癌和膀胱癌。 肿瘤的早期发现、早期诊断、早期治疗是患者获得长期生存的最主要途径。以肝癌
2010-01-14
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