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载体：携带外源DNA 进入宿主细胞的工具。 一、载体的功能 1.运送外源基因高效转入受体细胞。 2.为外源基因提供复制能力或整合能力。 3.为外源基因的扩增或表达提供条件。 二、载体应具备的条件 1.具有对受体细胞的可转移性。 2.具有与特定受体细胞相适应的复制位点

1) Digest DNA with two restriction enzymes such that one end is ExoIII susceptible (blunt or 5' overhang) and the other is ExoIII resistant

真核生物中，从个体的生长、发育、衰老、死亡，到组织的得化、调亡以及细胞对各种生物、理化因子的应答，本质上都涉及基因的选择性表达。高等生物大约有30000个不同的基因，但在生物体内任意8细胞中只有10%的基因的以表达，而这些基因的表达按特定的时间和空间顺序有序地进行着，这种表达的方

Preparation of plasmid DNA : a modified mini alkaline-lysis/PEG precipitation procedure. ABI; 1995 Materials GTE buffer (50mM glucose, 25m

1.核酸的分子杂交(molecular hybridization)技术概述 核酸的分子杂交(molecular hybridization)技术是目前生物化学和分子生物学研究中应用最广泛的技术之一，是定性或定量检测特异RNA 或DNA 序列片段的有力工具。它是利用核酸分子的碱

目的： 在体外连接组装而成的重组DNA分子只能转入合适的受体细胞，才能大量地进行复制、增殖和表达。通过实验学会重组DNA转化的最基本的操作以及如何提高转化效率的基本思路。 原理： 带有外源DNA片段的重组体分子在体外构建成后，需要导入适当的宿主细胞内进行繁殖或表达出具有一定

1）致癌化学物转化细胞：转化叙利亚地鼠胚胎细胞实验 1．取材：妊娠后第13天取材，取数个同窝胚胎，去头和内脏，在无菌条件下剪碎至米粒大小，再用0.25%胰蛋白酶（含0.01%EDTA）37℃ 消化30分钟，滤过、低速离心、吸除消化液、加入营养液、制备成细胞悬液、接种入75cm/

第一节 概述 　　在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载体中,一般缺乏此种转移所必需的mob基因,因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源DNA。 　

1、存放：超级感受态细胞必须从干冰运送包装箱取出直接放入–80℃冰箱的底部。一定不要用液氮来存感受态细胞。 1) 存放条件：超级感受态细胞对微小的温度改变也极度敏感，因此必须存放在–80℃冰箱的底部。即使是将细胞从一个冰箱转移到另一个冰箱也会导致转化效率的损失。采用BD Fal

下面的简单方案是Clhen等（1972）所用方法的变通方案，常用于成批制备感受态细菌，这些细菌可使每微克螺旋质粒DNA产生5x106-2x107个转化菌落，这样的转化效率足以满足所有在质粒中进行的常规克隆的需要。该方法完全适用于大多数大肠杆菌菌株，并且比方案Ｉ快速，重复性更好。该