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常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。前者外源DNA /RNA 不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA 转染效率较高，在转染后24-

准备： 1．灭菌试管400毫升细长烧杯2瓶，离心瓶4-6个（250ml）。 2．试剂：YEP1200ml（每瓶300ml共4瓶）+Kan1;1000，Rif1:500。 1/2MS+2%蔗糖（灭菌115度20分钟），Silwet在-20℃贮存。 步骤： 共转化农杆菌：于

[原理] DNA 限制性内切酶消化是基因分析中的关键步骤。内切酶是最关键的工具酶。限制性内切酶是一类具有严格识别位点,并在识别位点内或附近切割双链DNA 的脱氧核糖核酸酶。 酶单位规定为:在最适反应条件下 1 小时完全消化 lμg λDNA 的酶量为 1 个单位。需注意酶单位

关于如何选择基因诊断技术有两层含义：第一，什么情况下选择基因诊断；第二，如果选择了基因诊断，应当采用哪一种基因诊断技术。以下分别介绍。 1．选择基因诊断的依据。 （1）基因诊断可以弥补免疫学检测技术的缺陷免疫学诊断主要依赖于抗原抗体反应，应用于临床只能在体内产生抗体以后，也就

1.G418的配制：取1g G418溶于1ml 1M的HEPES液中，加蒸馏水至10ml，过滤消毒，4度保存。 2.细胞培养：取待测培养细胞，制备成细胞悬液，按等量接种入多孔培养板中，培养6小时左右开始加药。 3.制备筛选培养基：在100ug/ml~1000ug/ml范围内确

一、从在含20 mg/l Kanamycin和15 mg/l Gentamycin 6 ml的液体LB培养基中接种Agrobacterium 细胞，然后在28℃、200-220 rpm培养24 h。准备进行质粒提取。 质粒提取前，检查裂解液（Lysis Solution）是否有

磷酸钙-DNA共沉淀法 核酸以磷酸钙-DNA共沉淀物的形式出现时，可使DNA附在细胞表面，利于细胞吞入摄取，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内，进入细胞的DNA仅有1%～5%可以进入细胞核中，其中仅有不到1%的DNA可以与细胞DNA整合，在细胞中进行稳定表达，基因转导的

载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一、一个合格质粒的组成要素 复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如Amp+ ,

1.Safety precautions Hoechst 33258 is carcinogen and toxic.Use with adequate ventilation.Avoid contact with eyes,skin,clothing.Wash after h

(一) 鼠肝DNA的制备 原理 DNA是储存遗传信息的物质，是遗传的物质基础，它与生命的正常活动如种厉遗传、生长发育有密切关系。其结构与功能的研究是当前分子生物学研究的主要内容之一。 核酸广泛存在于生物中，DNA含有生物体的全部遗传信息，在生物组织中以核蛋白(DNP)形式