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热激转化(DH10B)protocol
Prior to getting cells: 1) Turn on 42 deg bath. Takes about 30 min to reach 42 deg. 2) Put 0.1 M sterile CaCl2 on ice. 3) One tube of ce
2010-01-21
DNA重组实验原理及过程
实验目的 要获得表达的基因AKP,必须构建重组子。 我们通过以下的方法构建重组DNA,转入受体菌,就可以表达出目的基因。 之所以重组子要进入细胞,是因为大肠杆菌中有修饰的机制,可以在转入表达载体时不被降解,高效表达。 实验原理及过程 实验步骤 实验原理 1 双酶切(
2010-01-21
DNA重组实验常见问题以及参考解决方案
TaKaRa的内切酶和NEB的内切酶哪个更好一些? 参考见解: TaKaRa的内切酶、NEB的内切酶两个公司的酶的品质都非常好。NEB公司的酶的活性很高,切出两条小带可能是因为出现星活性,可以试试把酶量减半。NEB的酶很多都是克隆的,所以纯度比较高。 应用磁性微球提取人全血基
2010-01-21
基因诊断技术的质控指标
临床医生了解基因诊断质控指标的含义,对于合理地选择检测方法和正确地分析与解释结果有很大的价值。 1.灵敏度 简单地说,灵敏度就是检测的最小值。一般来说,我们希望某一种检测技术的敏感度越高越好。理想地,病原体分离培养时能从待测标本中找到一个细菌或一个病毒颗粒或其他任何一个病原体
2010-01-21
转化子DNA的快速鉴定
快速细胞破碎法实验步骤: 1、挑取转化平板上的单菌接种于含相应抗生素的2ml LB中,37℃振荡培养至A590值为0.6~0.8。 2、取1ml菌液至1.5ml Eppendorf管中,9000rpm离心9min,去尽上清。 3、加入70μl Cracking Gel缓冲液
2010-01-21
辐射性杂交(radiation hybrid RH)制图技术原理和优缺点分析
辐射性杂交(radiation hybrid RH) 制图技术是1975 年由Goss 和Harris 创立的一种体细胞杂交技术,适用于构建人类基因组长范围内的高分辨率连续物理图谱。成熟的辐射性杂交制图技术是由Cox VR 等人于1990 年建立的。 1.原理 利用高剂量的X
2010-01-21
载体(vector)与质粒的类型、复制、套数以及不共容性
一、质粒 绝大多数的生物都是以DNA的形式来储藏其遗传信息。遗传物质要能生生不息地传给后代的首要条件就是它至少要具有一个复制原(ori, origin of replication,或译为复制起点),使整个基因体得以复制。含有复制原的遗传物质称为replicon,我们姑且把它译
2010-01-21
特定基因表达水平检测的试剂制备、实验步骤和注意事项
RNA -gel blot analysis 或Northern Blot 继分析DNA 的Southern杂交方法出现后,1977年Alwine等人提出一种与此相类似的、用于分析细胞总RNA 或含poly A尾的RNA 样品中特定mRNA 分子大小和丰度的分子杂交技术,这就是
2010-01-21
重组DNA技术和生物安全
重组DNA技术涉及到组合不同来源的遗传信息,从而创造自然界以前可能从未存在过的遗传修饰生物体(genetically modified organisms,GMOs)。最初,在分子生物学家中有人担心这些生物体可能具有不可预测的不良性状,一旦从实验室逸出将带来生物学危害。这种担心在
2010-01-21
各种常用转染方法比较
带正电的DEAE-葡聚糖与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞 瞬时转染相对简便、重复比磷酸钙好,但对细胞有一定的毒副作用,转染时需除血清且一般只用于BSC-1,CV-1,COS细胞系 Sigma-Aldrich(DEAE-Dextran Transfection
2010-01-21
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