• 冻融法回收DNA片段具体操作步骤

    1. 紫外灯下仔细切下含待回收DNA的胶条,将切下的胶条(小于0.6g)捣碎,置于1.5ml离心管中; 2. 加入等体积的Tris-HCl饱和酚(pH 7.6),振荡混匀; 3. -20℃放置5-10min; 4. 4℃离心10000g×5min,上层液转移置另一离
    2010-01-31
  • 长度多态性分型基础知识

    长度多态性是个体遗传特征在群体中的反映,对个体遗传标记的表型或基因型分型的技术方法分为限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length polymorphism,RFLP)和扩增片段长度多态性(Amplification Fragment Length
    2010-01-31
  • SSR简单序列重复标记实验步骤

    一、简介: SSR简单序列重复标记(Simple sequence repeat, 简称SSR标记),也叫微卫星序列重复,是由一类由几个核苷酸(1-5个)为重复单位组成的长达几十个核苷酸的重复序列,长度较短,广泛分布在染色体上。由于重复单位的次数的不同或重复程度的不完全相同,造
    2010-01-31
  • 核酸分子杂交方法介绍

    这是最早用于性病诊断的重组DNA技术。基本原理是具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下(适宜的温度及离子强度等)可按碱基互补原则形成双链,此杂交过程是高度特异的。杂交的双方是待测核酸及探针。待测核酸序列为性病病原体基因组或质粒DNA。探针以放射核素或非放射性核素标记,以利于杂交
    2010-01-31
  • 分子杂交(molecular hybridization)的概念和基本原理

    一、分子杂交的概念: 分子杂交(molecular hybridization)指具有一定同源序列的两条核酸单链(DNA或RNA),在一定条件下按碱基互补配对原则经过退火处理,形成异质双链的过程。 利用这一原理,就可以使用已知序列的单链核酸片段作为探针,去查找各种不同来源的基
    2010-01-31
  • DNA斑点杂交(Dot blot)实验方法

    斑点杂交(Dot blot)是将被检标本点到膜上,烘烤固定。这种方法耗时短,可做半定量分析。一张膜上可同时检测多个样品,为使点样准确方便,市售有多种多管吸印仪(Manifold),如MinifoldⅠ和Ⅱ、Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri-Dot,它们有许多孔,样品加
    2010-01-31
  • DNA斑点杂交(Dot blot)实验原理和操作步骤

    一、实验原理 用地高辛标记的HCV RNA探针检测HCV RT-PCR产物。 二、实验步骤 1. 处理: 将尼龙膜浸泡于20×SSC中吸足液体后,夹在两层滤纸中37℃烘烤20-30 min。(将尼龙膜置入烤箱后立即进行下一步操作) 2. 变性: 【原理】 使DNA样品
    2010-01-31
  • 限制性内切酶的常见问题与解决方案

    1. 如何做酶切反应? 该问题看似什么简单: DNA中加上酶,然后保温一段时间就可以了。但是在实际操作过程中,我们不断听到:切不动,装不上。问题在什么地方?能系列生产限制性内切酶的公司国际上,就那么几个,位列前3 的是NEB, Fermentas, SibEnzyme。这些公司
    2010-02-02
  • DNA斑点杂交(Dot blot)方法

    斑点杂交(Dot blot)是将被检标本点到膜上,烘烤固定。这种方法耗时短,可做半定量分析。一张膜上可同时检测多个样品,为使点样准确方便,市售有多种多管吸印仪(Manifold),如MinifoldⅠ和Ⅱ、Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri-Dot,它们有许多孔,样品加
    2010-02-09
  • Inoue法制备大肠杆菌超级感受态细胞

    实验步骤: 1、Inoculate from an overnight grown in LB.从培养过夜的LB平板上挑取单菌落 。 2、Grow in 250 ml "SOB" at 18℃ until OD600 = 0.6.(0.3)接种于250ml SOB,18度培养
    2010-02-10