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如何提高转染实验成功率
转染体系的关键组分对细胞转染实验的效率有何影响。 【组织培养试剂】 一般提示:优化您的细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂,并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各种市售培养基(如,RPMI 1640和DMEM)。培养基的成分包括营养物质(氨基酸,葡
2010-02-26
感受态细胞制备原理与操作
原理: 目前,感受态细胞的制备常用冰预冷的CaCl2处理细菌的方法制备,即用低渗CaCl2溶液在低温(0℃)时处理快速生长的细菌,从而获得感受态细菌。此时细菌膨胀成球形,外源DNA分子在此条件下易形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附在细菌表面,通过热激作用促进细胞对DNA的吸
2010-02-26
海马神经元细胞转染的实验技术方法
ABSTRACT This protocol describes two transfection methods for expressing GFP-tagged actin in primary neurons. The lipid reagent DOTAP (Roch
2010-02-26
基因转染技术简介
常用的基因转染技术是将外源基因导入靶细胞需要一定的载体和导入方法,基因转技术则是将纯化的含有靶基因的质粒DNA送入细胞内,并在细胞内表达。转染方法有多种,根据不同的细胞,贴壁或悬浮细所可选用不同的方法,其目的是要达到设置转染效率,影响转染产率的因素有多种,包括转染方法、操作技术、
2010-02-27
二苯胺法测定DNA含量
一、目的 学习和掌握测定DNA的定糖法(二苯胺法)的原理和操作技术。 二、原理 脱氧核糖核酸中的α—脱氧核糖在酸性环境中变成ω—羟基—γ酮基戊醛与二苯胺试剂一起加热产生蓝色化合物,在595nm处有最大的吸收,在每毫升含DNA20~400微克范围内,光密度与DNA的浓度成正比
2010-02-27
真核细胞表达的转录水平调控
近几年来,随着分子生物学、遗传学及其新技术的迅速发展,真核生物基因表达(geexprc~ioB)的问题已有了突破性的进展。认为真核细胞基因的表达,受到多层次的调控,诸如转录,转录后,翻译、翻译后等水平。而不同基因的表达受到不同水平的调控,其中最为主要的就是转录水平的调控。 转录
2010-02-28
基因表达调控
基因表达(gene expression):是指生物基因组中结构基因所携带的遗传信息经转录、翻译等一系列过程,合成特定的蛋白质,进而发挥其特定的生物学功能和生物学效应的全过程。并非所有基因表达过程都产生蛋白质,rRNA、tRNA的编码基因转录生成RNA的过程也属于基因表达。基因表
2010-02-28
植物表达载体转化农杆菌操作步骤
第一部分:农杆菌介导转化水稻 1、农杆菌选择:LBA4404、EHA105、GV3101 2、农杆菌活化:将保存的农杆菌在固体LB培养基上画线(或加或不加抗生素,LBA4404:Rif或Str;EHA105:Rif或 Str;GV3103:庆大霉素。如果不加抗生素就有可能造成
2010-03-02
分子生物学常用试剂配制方法
分子生物学常用试剂配制方法 氨苄青霉素 ﹡组分浓度 100mg/ml 氨苄青霉素 ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取5g Ampicillin置于50ml塑料离心管中。 2.加入40ml灭菌水,充分混合溶解之后定容至50ml。 3.0.22μm滤
2010-03-02
DNA扩增标准化操作规范
1 目的:DNA扩增标准化操作规范适用于HLA试验中的DNA扩增操作。 2 适用范围:DNA基因分型实验室。 3 依据:DNA扩增标准化操作规范 4 引用文件:德国BAG公司(以下简称BAG) 《Instructions for use Instructions for u
2010-03-06
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