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A technique for detecting, analyzing, and identifying proteins, similar to the western blot technique but differing in that protein samples

分子生物学技术的发展为利用生物反应器生产外源蛋白提供了许多方法和手段。到目前为止，已发展出了大肠杆菌、酵母、昆虫、哺乳动物细胞等多种蛋白表达系统，其中酵母表达系统是最近发展起来的新型表达系统。最先使用的是酿酒酵母，1981年Hitzeman等用酿酒酵母成功地表达了人干扰素，但该系

一. 概念 1．transformation 特指以质粒DNA或以它作为载体构建的重组子导入细菌的过程。 2．transfection 指噬菌体、病毒或以它们作为载体构建的重组子导入细胞的过程。 3．感受态与致敏过程 细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态，用理化方

大肠杆菌电转化感受态细胞制备 第一天： 1. 将适合菌株（如XL1-Blue, DH5α）置于LB或其他营养丰富的培养基上，在37°C下过夜培养 2. 高温灭菌大的离心瓶（250-500ml）以备第二天摇瓶用 3. 准备几瓶灭菌水（总量约1.5升），保存于冷冻室中以备第二

[原理] 核苷、核苷酸、核酸的组成成分中都有嘌呤、嘧啶碱基，这些碱基都具有共轭双键（ -C-C=C-C=C-），在紫外光区的250-280nm处有强烈的光吸收作用，最大吸收值在260nm左右。常利用核酸的紫外吸收性进行核酸的定量测定。 核酸的摩尔消光系数ε(P)表示为每升溶液

为确定感受态细胞的转化效率，可将一定量的完整质粒转化到感受态细胞中，取一部分转化的细菌，涂布到选择培养基上，可用菌落生长单位/μg DNA，按下面的方法计算感受态细胞的转化效率.计算公式：转化效率＝产生菌落的总数/铺板DNA的总量。 例如，取1μl（0.1 ng/μl）完整的质

根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-

1、 存放：超级感受态细胞必须从干冰运送包装箱取出直接放入–80°C冰箱的底部。一定不要用液氮来存感受态细胞。 1) 存放条件：超级感受态细胞对微小的温度改变也极度敏感，因此必须存放在–80°C冰箱的底部。即使是将细胞从一个冰箱转移到另一个冰箱也会导致转化效率的损失。采用BD

试验试剂： PLATE溶液： iZN ；40％聚乙二醇（PEG，分子量3350；Sigma P 3640）；0.1mol/L 醋酸锂 g；10 mmol/L Tris-HCl （pH7.5）；1 mmol/L EDTA； 实验步骤： 1、 用牙签从平板中挑取单菌落（直径2～

1．用牙签从平板中挑取单菌落（直径2～3mm），转移到1.5ml的无菌离心管中。 2．将10μl载体DNA（100μg）与10μl转化质粒DNA混合，振荡均匀。（若转化DNA是用未经RNA酶处理的“mini－prep DNA”方法制得，则不需加载体DNA）。 3．加0.5ml