【实验目的】
F 掌握拟南芥基因组DNA的抽提原理和方法。
【实验原理】
通常采用机械研磨的方法破碎拟南芥的组织和细胞，由于拟南芥细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨，材料易于破碎，并减少研磨过程中各种酶类的作用。
十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate，简称SDS)是离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来。再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入异戊醇使DNA沉淀，即得拟南芥总DNA。
【实验器材】
F 试剂耗材：提取液（0.2M Tris-HCl(pH7.5)、0.5%SDS、0.25M NaCl、1%β-巯基乙醇）、异丙醇、氯仿、异戊醇、RNAase A、研钵、液氮、1.5ml离心管。
F 仪器：恒温水浴锅、离心机。
【方法步骤】
（1） 取新鲜的拟南芥叶片2~3片加入1.5ml的离心管中，加入液氮，玻璃棒研碎。
（2） 研磨以后，加入600~700µl的提取液，混匀，然后在60℃下水浴20~60分钟。
（3） 4℃，12000rpm/min离心10分钟。
（4） 把上清转至新的离心管中，加入等体积的氯仿：异戊醇（24：1），4℃，12000rpm/min离心7分钟。
（5） 把上清转至新的离心管中，加入70%体积的异丙醇，混匀，4℃，12000rpm/min离心15分钟。
（6） 弃上清，70%乙醇洗涤沉淀2次，吹干。
（7） 沉淀用20~30µl含有0.1mg/ml RNAase A的ddH2O 溶解。
（8） 用0.8%的琼脂糖凝胶检测提取的拟南芥总DNA。
