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所需溶液配制 （1）TE缓冲液：10mM Tris×Cl，1mM EDTA，pH 8.0，高压灭菌。 （2）1M Tris×Cl：121.14g Tris碱溶于800ml双蒸水中，用盐酸 调pH值至8.0，定容至1000ml，高压灭菌。 （3）0.5M EDTA：186.

一、外周静脉血DNA提取 （一）目的与要求 1、 了解外周静脉血DNA提取的常见方法及其原理 2、 掌握法医学上常用的chelex100法及其原理，并能熟练操作。 （二）常见方法 目前基因组DNA的提取方法较多，如酚/氯仿、尿素提取法、氯化锌法、三乙醇月桂基硫酸盐法、碘

【实验目的】 学习从外周血中提取基因组DNA 的方法。 【实验原理】 以蛋白酶K 和SDS 裂解细胞释放DNA，而DNA 在浓度较高的氯化钠溶液中的溶解度很高，Na+与带负电的DNA 结合成DNA 钠盐，这时DNA 在溶液中呈溶解状态。以氯仿抽提DNA，去除溶液中蛋白杂质后

【实验目的】 掌握从琼脂糖凝胶中回收纯化目的DNA 片段的方法。 【实验原理】 在NaI 存在的条件下，融化含有DNA 片段的凝胶块，使DNA 片段吸附于硅胶树脂上，最后用TE 缓冲液溶出DNA。 【实验仪器】 1．台式高速离心机 2．水浴锅 3．电泳仪及水平电泳槽

1．目的 学会最常用的小量制备质粒DNA的碱裂解方法。 2．原理 根据共价闭合环状质粒DNA与线性DNA在拓扑学上的差异来分离。在pH12.0∼12.5这个狭窄的范围内，线性DNA双螺旋结构解开而被变性。尽管在这项的条件下共价闭合环状质粒DNA也会变性，但两条互补链彼此互相

整合外源DNA并将其带入宿主细胞的过程是分子克隆的关键。而在此过程中携带外源基因的工具为载体。载体有1）在宿主细胞中具独立复制能力；2)带抗性等选择标记；3)有合适的限制性内切酶位点，可插入一定片断长度的外源DNA而不影响自身复制的特点。目前经基因操作已构建了一大批适合不同宿主细

原理 在碱性条件下，染色体DNA和质粒DNA都发生变性，但质粒DNA的超螺旋共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离，当用酸性的高盐缓冲液将pH中和至中性时，变性的质粒DNA又恢复到原来的构型并溶解在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构。通过离心，缠结的染色体DN

一、原理 从全血制备白细胞DNA，可用非离子去污剂Triton X-100直接破裂血中红细胞和白细胞的细胞膜，释出血红蛋白及细胞核，在反应体系中含一定浓度蔗糖，维护核膜内外的渗透压，以防止核膜破裂，通过离心等手段即可获得白细胞的细胞核。向核悬液中加入SDS破坏核膜，并使DNA从

一、实验目的 掌握植物总DNA的抽提方法和基本原理。学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。 二、实验原理 通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化

目 的 1．为进一步鉴定重组质粒提供适量的质粒DNA。 排除自身环化。鉴定方法主要有： （1）PCR法及其利弊。采用载体两端的引物进行PCR，一旦插入成功，则可以在电泳的凝胶中见到与插入片段分子量大小一致的PCR产物。 （2）Southern blot法及其利弊。将培