一、原理
质粒（plasmid）是一种染色体外的稳定遗传因子，大小从1~200kb不等，为双链、闭环的DNA分子，并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制和转录能力，能在子代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。质粒在细胞内的复制一般有两种类型：紧密控制型和松弛控制型（高拷贝）。
从细菌分离质粒DNA的方法都包含3个基本步骤：培养细菌使质粒扩增；收集和裂解细胞；分离和纯化质粒DNA。采用溶菌酶可以破坏菌体细胞壁，十二烷基磺酸纳（SDS）可使细胞膜裂解。经溶菌酶和SDS处理后，细菌染色体DNA会缠绕附着在细胞碎片上，同时由于细菌染色体DNA比质粒大得多，易受机械力和核酸酶等的作用而被切断成不同大小的线性片段。当用强热或酸、碱处理时，细菌的线性染色体DNA变性，而共价闭合环状DNA的两条链不会分开，当外界条件恢复正常时，线状染色体DNA片段难以复性，而是与变性的蛋白质和细胞碎片缠绕在一起，而质粒DNA双链又恢复原状，重新形成天然的超螺旋分子，并以溶解状态存在于液相中。
二、实验试剂
SDS 溶菌酶 酚 氯仿 无水乙醇 葡萄糖 EDTA 乙酸钾 NaOH Tris碱等
三、操作步骤
（一）细菌培养和收集
将含有质粒的Ecoli菌种接种在LB固体培养基（含50 μg/ml Amp）中，37oC培养12~24小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB液体培养基（含50μg/ml Amp）中，37 oC振荡培养约12小时至对数生长后期。
（二）质粒DNA的少量快速提取（碱法）
1．取1.5ml培养液倒入1.5ml eppendorf管中， 4 oC下12000g 离心30s，弃上清，倒置片刻，使液体流尽。
2．菌体沉淀重悬于100μl溶液Ⅰ中，剧烈振荡使菌体充分重悬，加入新配制的溶液Ⅱ200μl，盖紧管口，立即将离心管缓慢颠倒数次直到溶液变清亮，冰浴5min。
3．加入150μl预冷的溶液Ⅲ，盖紧管口，缓缓颠倒离心管数次直到白色沉淀充分形成，冰浴5min，离心5分钟
4．上清液移入干净eppendorf管中，加入等体积的酚/氯仿（1 :1），震荡混匀，4 oC下12000g离心5分钟。
5．将水相移入干净eppendorf管中，加入2倍体积的无水乙醇，震荡混匀后置于-20 oC冰箱中20分钟，然后4oC下12000g离心5分钟。
6．弃上清液，将管口敞开倒置于卫生纸上，使所有液体流出，加入1ml 70%乙醇液沉淀一次，4 oC下12000g离心5~10分钟。
7．吸除上清液，将管倒置于卫生纸上使液体流尽，真空干燥10分钟或室温干燥。
8．将沉淀溶于20μl TE缓冲液（pH8.0，含20μg/ml RNaseA）中，储于-20oC冰箱中。
【注意】
提取过程尽量保持低温。
采用酚/氯仿去除蛋白效果较单独用酚或氯仿好。
沉淀DNA通常用冰乙醇，低温条件下放置时间稍长可使DNA沉淀完全。
三、相关试剂配制
（1）溶液I：50mmol/L 葡萄糖溶液
25mmol/L Tris-Cl (pH8.0)
10mmol/L EDTA (pH8.0)
（2）溶液II：0.2mol/L NaOH, 1%SDS
（3）溶液III：5mol/L的乙酸钾
