一、原理
l噬菌体是一种温和性噬菌体，可以进行裂解性和溶源性生长。当噬菌体感染宿主菌时，它的DNA注入宿主菌细胞，外壳蛋白留在外面，在进行裂解性生长时，它的基因组在宿主细胞内经过复制和重新包装后形成新的噬菌体颗粒，并使宿主细胞裂解；在进行溶源性生长时，它的DNA整合到宿主菌的染色体DNA上，并与宿主菌染体DNA一起复制，当染色体DNA受到损伤时，噬菌体DNA便从染色体DNA中分离出来，进行裂解性生长。
二、试剂和用品
1、5ml LB液体培养基一支，内含0.2%麦芽糖10mM硫酸镁。
2、软琼脂糖培养基。
3、LB琼脂固体平板培养基，每组3皿。
4、l噬菌体悬浮液（SM）。
5、20％麦芽糖贮备液（过滤除菌，4℃冰箱内保存）。
6、1M硫酸镁贮备液。
7、氯仿。
8、无菌带盖的玻璃试管（15mm×100mm），每组3支。
9、无菌吸管，恒温水浴锅、离心机、微量取样器。
三、实验步骤
1、取5ml LB培养液一支，加20％麦芽糖和1M硫酸镁各50ul。接种一环l噬菌体敏感的大肠杆菌，于30℃摇床（250rpm）上培养5－6小时，当OD600为1.0－1.5时于4℃条件下保存备用（一周内有效）。
2、将配制的软琼脂糖培养基在沸水浴中融化，然后于50℃恒温水浴中平衡3－4小时待用。将LB固体平板培养基置于37℃培养箱内平衡2－3小时备用。
3、转染：取三支干净无菌有盖的玻璃试管，作上标记，分别加入如下溶液，混合后在37℃摇床(250rpm)上培养30分钟。
试 管 编 号
组分
1#
2#
3#
受体菌(ul)
100
100
0
l噬菌体贮备液(ul)
50
0
50
无菌水(ul)
0
50
100
4、于每一试管中加入3－4ml预平衡到37℃的软琼脂培养液，迅速混合，均匀地倒在预平衡的LB固体平板培养基上。
5、室温下放置10分钟，然后倒置在37℃培养箱内培养过夜。次日观察，可以看到长满菌苔的平板上出现透亮的噬菌斑。
6、加入15ml噬菌体悬浮液，室温下振摇2小时。
7、收集裂解液于无菌离心管中，加入2－3滴氯仿混合，于4℃条件下保存。使用前离心，取用上清液。
