一、原理
l噬菌体DNA作为一种基因工程载体，在组建动植物基因组DNA和cDNA文库方面具有重要用途。lDNA通常被包在一个蛋白质外壳中。蛋白质外壳经链霉蛋白酶（或蛋白酶K）和SDS处理后，发生解体和变性，最后可通过苯酚抽提和离心被去除。保留在水相中的DNA可经乙醇或异戊醇沉淀后离心收集。
二、目的
进一步了解l噬菌体的特性，掌握l噬菌体DNA的提取原理和分析方法。
三、试剂与用品
1、l噬菌体原液。
2、受体菌。
3、LB液体培养基（5ml/管，100ml／瓶）。
4、LB固体平板培养基。
5、1M MgSO4。
6、20％PEG 8000/2M NaCl。
7、SM溶液。
8、DNase(10mg/ml)。
9、RNase(10mg/ml)。
10、0.5M EDTA(pH 8.0)。
11、Proteinase K(10mg/ml)。
12、10％SDS。
13、3M醋酸钾。
14、TE缓冲液。
四、操作步骤
1、接种一个噬菌体敏感菌单菌落于5ml含0.2%麦芽糖和10mM硫酸镁的LB培养液中，振荡培养5－6小时，至OD值为1.0-1.5。
2、预热50ml LB培养液至37℃。
3、取一干净无菌带盖的玻璃试管，加入0.1ml受体菌和0.05ml噬菌体贮备液，37℃振荡培养30分钟。
4、将上述感染物转入预热的50ml LB培养液中，再补加500ul 1M硫酸镁，并于摇床上培养过夜。
5、次日，加3ml氯仿，37℃振荡培养15分钟，使细菌裂解。
6、将培养物转入50ml无菌带盖的离心管中，8000rpm，离心20分钟。
7、将上清液分装到3个50ml 无菌带盖的离心管中（每管15ml）。每管加入15ml预冷的PEG/NaCl（一倍体积）混合后，在冰浴上放置60分钟。
8、4℃，9100rpm离心20分钟。
9、弃去上清液，在吸水纸上倒置数分钟。
10、用500ul SM液悬浮噬菌体，转入1.5ml 的Eppendorf管中。
11、加1ul DNase和4ul RNase，混合，37℃温育20分钟。
12、加50ul EDTA，混合后65℃水浴5分钟。
13、加2ul Proteinase K和25ul 10％SDS，混合后65℃水浴15分钟。
14、加入100ul 3M醋酸钾，冰浴上静置20分钟。
15、1200rpm离心15分钟，分相。
16、转上清液到新的Eppendorf管中，加600ul异丙醇, 轻轻颠倒2－3次，冰浴10分钟。
17、离心，13000rpm,10分钟。
18、弃上清液，加1ml 70％乙醇，冲洗，不必悬浮起来。
19、13000rpm离心10分钟，弃上清液。
20、空气干燥。
21、加50ul TE Buffer悬浮，4℃保存待用。
22、进行琼脂糖凝胶电泳，检测制备的样品（参见实验https://shiyan.ebioe.com/DNAagarosegel-electrophoresis.htm）。
