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【原理】 碱裂解分离质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离的目的。当细胞在NaOH和SDS溶液中裂解时，蛋白质与染色体DNA发生变性，加入醋酸钾中和液，进行离心后，它们随细胞碎片沉淀下来，而变性的质粒DNA又恢复到原来的构型留在上清中，再经酚/氯仿

[实验原理] 质粒是存在于染色体外的小型双链环状DNA，大小在1-200kb之间，能在宿主菌中自主复制。宿主细胞中质粒的拷贝数各有不同，一种是低拷贝数的，每个细胞仅含有一个或几个质粒分子，称为“严紧型”复制的质粒，另一类高拷贝的质粒，拷贝数可达到20个以上，这种类型称为“松弛型

[实验原理 ] λ噬菌体是最早使用的克隆载体，λ噬菌体的基因组是一长度约为50kb的双链DNA分子，它在宿主细胞有两种生活途径，其一是裂解生长，环状DNA分子在细胞内多次复制，合成大量噬菌体基因产物，装配成噬菌体颗粒，裂解宿主菌再进行下一次感染；其二是溶源性生长，即感染细胞内λ

[实验原理] 在EDTA和SDS等去污剂存在下，用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提，可以得到哺乳动构基因组DNA，用此方法得到的DNA 长度为100-150 kb，适用于L嘴菌体构建基因组文库和 Southern分析。 通过本实验了解并掌握提取基因组DNA的原理和步骤，以及相对

一、操作步骤： 1.取15ml研磨器，加入5ml血块，4-5ml溶血试剂，研磨至无凝块存在。转移到50ml离心管中，2500rpm，10min。 2.去上清，假溶血试剂清洗一遍，2500rpm，10min，至无红色存在。 3.去上清，加1ml细胞裂解液，转移到离心管，加20

1. 紫外灯下仔细切下含待回收DNA的胶条，将切下的胶条（小于0.6g）捣碎，置于1.5ml离心管中； 2. 加入等体积的Tris-HCl饱和酚（pH 7.6），振荡混匀； 3. -20℃放置5-10min； 4. 4℃离心10000g×5min，上层液转移置另一离

1、接种5ml LB，37℃摇床过夜培养（12小时） 2、离心，3000rpm，5min去上清 3、振荡混匀沉淀，分装在2个离心管中，spin一下，吸去上清，加入150μl的溶液I （50mmol/L葡萄糖， 25mmol/L Tris·Cl（PH8.0）， 10mmo

1、前四部同苯酚/氯仿溶液抽提法（用Solution I II III处理） 2、加等体积的异丙醇，混匀，沉淀DNA，12000rpm离心7min.去上清，尽量去干净。 3、用少量70%乙醇洗一下（洗去异丙醇），离心去尽酒精，50℃烘干沉淀，用适量ddH2O（100ul）充分

1、在长波紫外灯下切下含有目标DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸干凝胶表面的液体并切小。计算凝胶的重量，该重量作为一个凝胶体积（如如 100mg=100ul）。 2、根据凝胶的浓度，加DE-A 液 凝胶浓度 DE-A溶液体积 ≤1.0%

操作原理与colony hybridization 相同，但是将滤膜移置于含有IPTG 及5-bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-glucuronide （X-Gluc） 的培养基。 X-Gluc 可被GUS作用而释出蓝色的产物，若转型株所带的质体接有gus