1、接种5ml LB,37℃摇床过夜培养(12小时)
2、离心,3000rpm,5min去上清
3、振荡混匀沉淀,分装在2个离心管中,spin一下,吸去上清,加入150μl的溶液I (50mmol/L葡萄糖, 25mmol/L Tris·Cl(PH8.0), 10mmol/L EDTA(PH8.0) 在10lbf/in2(6.895×104Pa)高压蒸气下灭菌15min(8磅),贮存于4℃,剧烈振荡5分钟打散菌体(菌体不打散容易在产物中出现较多蛋白)。
4、加入300μl溶液II(0.2mol/LNaOH,1%SDS,用2倍的溶液现配现用)后立即振荡混合均匀,处理2分钟后加入225μl溶液 III(5mol/L乙酸钾 60ml,冰乙酸 11.5ml,水 28.5ml)混合均匀,12000rpm离心5min,取上清液中于新的离心管。
5、加120μl酸性苯酚/氯仿溶液,振荡混匀,12000rpm离心5min,再取上清液中于新的离心管中。
6、用120ul氯仿重复操作5。
7、加等体积的异丙醇或2倍体积的乙醇,混匀,12000rpm离心7min。
8、沉淀用70%乙醇洗涤两次,每次10min。50℃烘干后加适量无菌去离子水(ddH2O)溶解,-20℃保存。