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TRIzol法同时提取DNA、RNA和蛋白质
TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。TRIzol试剂有多组分分离作用,与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比,最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质.TRIzol使样品匀浆化,细胞裂解,溶解细胞内含物,同时因含有RNas
2010-03-09
临床样品基因组DNA小量抽提标准操作规程(SOP)
目的: 1.从人或动物血液中抽提DNA 。 2.从体液,唾液,尿液中抽提DNA 。 3.从人体组织,切片和各种临床样品中抽提DNA 。 4.抽提出的DNA 可以用于PCR及相关诊断。 原理: 临床常常需要从各种生物组织或细胞中抽提基因组DNA ,用于病症的辅助性分析和
2010-03-09
微量DNA的纯化操作步骤
1.对于微量DNA样品溶液(如100ml以下),应预先将DNA溶液以TE或无菌水稀释至一定体积。以减少第5步中的DNA损失。 2.加入等体积的酚:氯仿:异戊醇[1](25:24:1)。 3.剧烈振荡管中内容物,将水相和有机相充分混匀,使之成为乳浊液。 4.室温下静置以初步分
2010-03-09
质粒DNA的抽提与纯化实验方法和问题解答
目的 : 采用碱变性法,学习小规模制备质粒DNA的技术 原理 : 碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环
2010-03-09
Deproteination using phenol/chloroform
Deproteination using phenol/chloroform (Maniatis et al.,1982) 'Phenol' as used is Analar grade.Phenol should be melted at 65℃, 8-hydroxyqu
2010-03-09
动植物组织和细菌基因组DNA的提取与检测
基因组DNA的提取概述 基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交(包括RFLP)及PCR分离基因等。利用基因组DNA较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。加入一定量的异丙醇或乙醇,基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用
2010-03-09
Large scale nuclear extract preparation
Hattoti's protocol adapted to cell culture : Hattori M,Tugores A,Veloz L,Karin M,Brenner D (1990)A simplified method for the preparation of
2010-03-09
Yeast Nuclear Extract (Small Scale)
Hahn Lab (adapted from J.Leatherwood,Ptashne lab) last modified Mon,Aug 27,2001 Cell Growth 3 liters of cells are grown in YPD (3% glucos
2010-03-09
琼脂糖凝胶(Agaros gel)层析的技术数据
琼脂糖凝胶作为核酸检测主要也是理想材料,使用十分广泛,其理化性质一些参数如下表: (琼脂糖是琼脂内非离子型的组分,它在 0 ~ 4 ℃, pH 4~9 范围内是稳定的。) 名称、型号 凝胶内琼脂糖百分含量( W/W ) 排阻的下限( Mr ) 分级分离的范围( Mr )
2010-03-09
Chelex-100法和盐析法提取生物检材中的DNA
一、Chelex-100法提取生物检材中的DNA Chelex 100能有效除去非核酸有机物,主要用于提取全血或血痕、精液或精斑、混合斑、毛发、培养细胞等。但因生物样本来源不同其操作方法有所差异,以下分别介绍: (一)全血 (1)取3~10μl全血加到0.5ml离心管中,加
2010-03-09
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