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Growing up of BAC clones
1. BACs are usually supplied as stabs in agar (2.5 ml screw-top tubes filled with LB agar, stabbed with a toothpick which has been put into
2010-03-05
Preparation of Nested Deletions
Preparation of Nested Deletions Procedure: 1) Need to cut 10 µg of plasmid in two spots ('A' and 'B') in polylinker. 'A'cut is 'ith a rest
2010-03-05
Cosmid Library
METHOD: 1.Isolate chromosomal DNA by using the CTAB protocols in current Pr M R. 2.Make a CsCl preparation of pLAFr3 (or other appropriate
2010-03-05
Screening lambda cDNA or genomic libraries
Media Need LB plates (9 cm or 14 cm)to plate the library and do secondary screens.I typically screen about 500,000-1 million plaques for a
2010-03-05
基因组DNA文库构建必备实验技巧
基因组DNA文库用途十分广泛,如用于人类及动植物基因组学研究,基因表达调控研究,分析、分离特定的基因片段等。通常情况下,基因组文库构建的基本流程可以归为四大步骤:分离基因组DNA、对基因组DNA作相关的处理、将基因组DNA片段连接入载体、将重组载体转入宿主细胞。 一、分离基因组
2010-03-05
cDNA文库构建技术-cDNA链的反转合成
构建cDNA文库是一种获得目标基因并进一步进行基因重组,基因克隆的重要方法,而在该文库构建中有mRNA 逆转录出cDNA是一步极为关键的操作。mRNA的逆转录主要由MMLV、AMV两种逆转录酶催化合成cDNA,在这个逆转录过程中,模板mRAN及逆转录酶是两个最重要的影响因素。对于
2010-03-21
cDNA链的连接、包装及转染
一:仪器:同cDNA文库构建技术-cDNA链的反转合成 二:试剂:EcoRⅠ连接子试剂盒 三:操作: 1:cDNA加接头反应 a:按下表准备反应体系 10×缓冲液T4DNA连接酶3μl BSA 3μl cDNA 2.5μl 连接子 1μl T4DNA连接酶 1μ
2010-03-21
Southern杂交实验
[实验原理] Southern 杂交是分子生物学的经典实验方法。其基本原理是将待检测的DNA样品固定在固相载体上,与标记的核酸探针进行杂交,在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号。通过Southern杂交可以判断被检测的DNA样品中是否有与探针同源的片段以及该片段
2010-03-15
Southern blot杂交鉴定(cross identification)
1)取10ul待测DNA,于一定浓度的琼脂糖凝胶上进行电泳。(20mL,1.0%凝胶,) 2) 凝胶用溴化乙锭染色,切掉凝胶四周多余部分,并在凝胶的一角作一记号, 拍照记录电泳结果(拍照时, 凝胶旁放一尺子)。 3) 杂交用胶的制备 (做以下步骤两组合一) A.将凝胶浸没入
2010-03-07
Southern杂交一般操作方法
一 基因组酶切和电泳 在200 μl 微量离心管中加入: 25 μl DNA样品(约10μg), 3μl 限制性内切酶(MBI,10 U/ μl) 5 μl 相应的10×buffer, 补水到50μl。 然后加一滴矿物油覆盖, 稍微离心后放于37℃水浴8-12小时。酶
2010-03-07
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