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[原理] DNA是通过异羟基洋地黄毒苷（digoxigenin，Dig）配基标记的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸（dUTP）随机插入结合而被标记。dUTP通过间臂连结类固醇半抗原异羟基洋地黄毒苷酸基，形成Dig-dUTP，杂交反应后，杂交的靶DNA通过酶联免疫法与一个抗体复合物[抗异羟基

1. Depurination of DNA fragments: Wash gel in 0.25 M HCl 5' (small gels), 7' (large gels) 2. Denaturation: Wash gel in (0.5 M NaOH, 1.5 M N

About 1/2 to 1 cm of tail should be cut from properly marked mice (using toe or ear clipping, etc), about the age of 2-3 weeks. Place these

转膜是把DNA 从琼脂糖凝胶中转移到固相支持物（一般是尼龙膜）上固定，是进行各种后续研究（如 RFLP 分析，阳性克隆的筛选验证等所有涉及分子杂交的研究）的前提。 实验目的： 掌握 Southern blotting 的原理及操作步骤 实验原理： 1．转膜的方式： 向上

The standard solution typically used for both pre-hybridisation and hybridisation is based on that given in Maniatis et al.,(1982)with both

1. Run the gel as normal. Often for genomic southerns it is desirable to run long gels (18cm) over 4-6hrs. 2. Photograph the gel with a rul

（一）硝酸银显影液 ①1%明胶60mi. ②柠檬酸缓冲液10ml,pH3.4（柠檬酸2.55g,柠檬酸钠2.35g,加水至10m1）。 ③对苯二酚1~1.7g,加水至30ml. ④硝酸银50~100mg,加水至2ml. 用前①~③液混合过滤，最后加入④液。 （二）乳酸

在胶体中的DNA 可利用毛细现象的作用将DNA 牵引转印至覆盖在胶片上的滤膜，经烘烤或UV 照射后，可使DNA 固定在膜上，以进行探针的杂合（hybridization） 反应。 仪器用具： 玻璃缸；玻璃板或吸水海绵；Crosslinker （Stratalinker 180

进行杂合反应时所使用的探针若为放射性物质所标定者，杂合讯息可经由放射显影术 （autoradiography） 侦测出来；若为DIG所标定者，则需借助anti-DIG抗体与碱性去磷酸酶 （alkaline phosphatase, AP） 的conjugate,并利用碱性去磷酸酶

预杂交液的制备：根据要杂交的膜的数量配制预杂交液，每25 ml预杂交液（1~2张膜）的成分组成如下： H2O 15 ml 20×SSPE 6.25 ml 50×Denhardt 2.5 ml 10% SDS 1.25 ml 100 mg/ml鲑鱼精DNA（缓加）