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非放射性Dig-dUTP
[原理] DNA是通过异羟基洋地黄毒苷(digoxigenin,Dig)配基标记的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸(dUTP)随机插入结合而被标记。dUTP通过间臂连结类固醇半抗原异羟基洋地黄毒苷酸基,形成Dig-dUTP,杂交反应后,杂交的靶DNA通过酶联免疫法与一个抗体复合物[抗异羟基
2010-03-08
Southern Blotting: DNA Transfer
1. Depurination of DNA fragments: Wash gel in 0.25 M HCl 5' (small gels), 7' (large gels) 2. Denaturation: Wash gel in (0.5 M NaOH, 1.5 M N
2010-03-08
Tail Chop Southern Protocol
About 1/2 to 1 cm of tail should be cut from properly marked mice (using toe or ear clipping, etc), about the age of 2-3 weeks. Place these
2010-03-08
电泳、转膜
转膜是把DNA 从琼脂糖凝胶中转移到固相支持物(一般是尼龙膜)上固定,是进行各种后续研究(如 RFLP 分析,阳性克隆的筛选验证等所有涉及分子杂交的研究)的前提。 实验目的: 掌握 Southern blotting 的原理及操作步骤 实验原理: 1.转膜的方式: 向上
2010-03-08
Standard hybridization technique
The standard solution typically used for both pre-hybridisation and hybridisation is based on that given in Maniatis et al.,(1982)with both
2010-03-08
SOUTHERN BLOT的步骤
1. Run the gel as normal. Often for genomic southerns it is desirable to run long gels (18cm) over 4-6hrs. 2. Photograph the gel with a rul
2010-03-08
物理显影液的配制
(一)硝酸银显影液 ①1%明胶60mi. ②柠檬酸缓冲液10ml,pH3.4(柠檬酸2.55g,柠檬酸钠2.35g,加水至10m1)。 ③对苯二酚1~1.7g,加水至30ml. ④硝酸银50~100mg,加水至2ml. 用前①~③液混合过滤,最后加入④液。 (二)乳酸
2010-03-08
Southern 转印分析
在胶体中的DNA 可利用毛细现象的作用将DNA 牵引转印至覆盖在胶片上的滤膜,经烘烤或UV 照射后,可使DNA 固定在膜上,以进行探针的杂合(hybridization) 反应。 仪器用具: 玻璃缸;玻璃板或吸水海绵;Crosslinker (Stratalinker 180
2010-03-08
以酶联免疫反应与碱性去磷酸酶呈色反应侦测杂合讯息
进行杂合反应时所使用的探针若为放射性物质所标定者,杂合讯息可经由放射显影术 (autoradiography) 侦测出来;若为DIG所标定者,则需借助anti-DIG抗体与碱性去磷酸酶 (alkaline phosphatase, AP) 的conjugate,并利用碱性去磷酸酶
2010-03-08
小麦Southern杂交分析方法
预杂交液的制备:根据要杂交的膜的数量配制预杂交液,每25 ml预杂交液(1~2张膜)的成分组成如下: H2O 15 ml 20×SSPE 6.25 ml 50×Denhardt 2.5 ml 10% SDS 1.25 ml 100 mg/ml鲑鱼精DNA(缓加)
2010-03-08
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