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实验原理 一、DNA的限制性内切酶酶切分析 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:I类和III类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。III类酶结合于识别位点并

1．目的 学会用限制性内切酶切割质粒DNA。 2．原理 II型限制性内切酶能识别双链DNA内部的特殊序列并在识别位点处将双链切断，形成粘性末端或齐平末端，通过电泳酶切后的DNA混合物能够确认和分离酶切片段。 3．器材 旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml微

【实验原理】 DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷在电场中向正极移动。由于糖－磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此他们能以相同的速度向正极方向移动。在一定的电场强度下，DNA 分子

构建人VH基因节段文库 [器材和试剂] ● PCR试剂和设备 ● 自pHENl中天然scFv文库制备的scFv基因文库模板DNA（单链和双链DNA 10ng/ul） ● Genecle&n试剂盒（Qbiogene） ● PVH3FoR1引物： 5'-TCG C

[器材和试剂] Winard PCR纯化试剂盒 （Promega） PCR试剂和设备 用于连接scFv和pHENl DNA以及将scFv文库电转化到大肠杆菌TGl株的试剂和设备 FDSEQ引物 扩增的VHCDR3基因文库和VL基因， [方法] 1. 配制4个25u

[器材和试剂] ● PCR试剂和设备 ● Geneclean试剂盒（Qbiogene） ● VHFOR随机引物（见下文），10pmol/ul ● LMB3引物 ● VHBACK引物； 5,-TTT GAC TAC TGG GGCCAG GG-3', 10p

This section describes how to amplify a library with minimal danger of substantially reducing its diversity.Amplification is accomplished by

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YEAST TWO-HYBRID SCREEN WITH LIBRARY AND BAIT (The following protocol is for use with the LIBRARY transformation only) Day 1: Grow an ove

This protocol is intended to make shotgun libraries from BACS that are to be fully sequenced and assembled. To minimize chimeric clones, an