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限制性内切酶(Restriction enzyme, endonuclease)的研究进展
30多年前,当人们在对噬菌体的宿主特异性的限制-修饰现象进行研究时,首次发现了限制性内切酶。细菌可以抵御新病毒的入侵,而这种"限制"病毒生存的办法则可归功于细胞内部可摧毁外源DNA的限制性内切酶。首批被发现的限制性内切酶包括来源于大肠杆菌的EcoR I和EcoR II,以及来源于
2010-08-12
限制酶在各种NEBuffer中的活性
限制酶在各种NEBuffer 中的活性 (NEBuffer Activity Chart for Restriction Enzymes) 对应每一种限制性内切酶,New England Biolabs 均提供彩色盖子的10X NEBuffer,以保证100%活性。下面表格中
2010-03-05
Restriction Enzyme Buffer
Restriction Enzyme Buffer Most enzymes can use REact buffers; however, some are made up separately. Use fresh Milli-Q water , siliconized or
2010-03-05
限制性内切酶质量控制(Restriction Endonucleases: Quality Control)
单位定义 限制性内切酶的一个活性单位是指,在50μl 的反应体系里,采用随酶提供的 NEBuffer,用1个小时的时间,彻底消化1μg底物DNA所需要的酶量。 酶切反应应在带盖的Eppendorf 管中进行,选用技术数据卡上所标明的适宜温度。在确定酶活性之前,浓缩的酶应该用推荐
2010-03-05
DNA酶切及凝胶电泳(gel electrophoresis)
第一节 概 述 一. DNA的限制性内切酶酶切分析 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并
2010-03-05
酶切反应(Setting Up a Restriction Endonuclease Reaction)
一、 建立一个标准的酶切反应 目前大多数研究者遵循一条规则,即10个单位的内切酶可以切割1μg不同来源和纯度的DNA。通常,一个50μl的反应体系中,1μl的酶在1X NEBuffer终浓度及相应温度条件下反应1小时即可降解1μg已纯化好的DNA。如果加入更多的酶,则可相应缩短
2010-03-05
DNA酶切反应
一、 DNA 酶切反应 1、将清洁干燥并经灭菌的eppendorf管(最好0.5ml)编号,用微量移液枪分别加入DNA 1μg和相应的限制性内切酶反应10×缓冲液2μl,再加入重蒸水使总体积为19μl,将管内溶液混匀后加入1μl酶液,用手指轻弹管壁使溶液混匀,也可用微量离心机甩
2010-03-05
Preparation of blunt-end DNA fragmen
Richard Powell Department of Microbiology, National University of Ireland, Galway, Ireland Frank Gannon European Molecular Biology Labora
2010-03-05
酶切反应建议
一、 建立一个标准的酶切反应 目前大多数研究者遵循一条规则,即10个单位的内切酶可以切割1μg不同来源和纯度的DNA。通常,一个50μl的反应体系中,1μl的酶在1X NEBuffer终浓度及相应温度条件下反应1小时即可降解1μg已纯化好的DNA。如果加入更多的酶,则可相应缩短
2010-03-05
Restriction Enzyme Digestion of DNA
Materials: 10X restriction enzyme buffer (see manufacturer's recommendation) DNA sterile water restriction enzyme phenol:chloroform (1:
2010-03-05
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