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酶切的原理： DNA酶切一般分为质粒直接酶切和PCR产物酶切。限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类、Ⅱ类、Ⅲ类。Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存

一、实验目的 1．通过对DNA的酶切，学会设计构建体外重组DNA分子； 2．根据目的基因合理选择载体与限制性内切酶； 3．掌握DNA的酶切技术。 二、实验原理 限制性内切酶是从细菌中分离出来的一种能在特异位点切割DNA分子的核酸内切酶，目前已从多种细菌中分离出超过400

快速细胞破碎法实验步骤 1、 挑取转化平板上的单菌接种于含相应抗生素的2ml LB中，37℃振荡培养至A590值为0.6～0.8。 2、 取1ml菌液至1.5ml Eppendorf管中，9000rpm离心9min，去尽上清。 3、 加入70μl Cracking Gel缓

一、实验目的 1．通过对DNA的酶切，学会设计构建体外重组DNA分子； 2．根据目的基因合理选择载体与限制性内切酶； 3．掌握DNA的酶切技术。 二、实验原理 限制性内切酶是从细菌中分离出来的一种能在特异位点切割DNA分子的核酸内切酶，目前已从多种细菌中分离出超过400

如今，质粒载体中限制酶切位点的种类极为繁多，因而通常都有可能找到某种带限制酶切位点恰恰与外源DNA片段本身毫无二致的载体。这就具备一个不可比拟的优点，也应是可以用相应的限制酶消化重组质粒崦回收外源DNA。 另一种方案，则是把片段插入到载体中能产生匹配末端的任何位点中。例如，识别

药品试剂： 纯化的gusA 片段及pQE31 BamHI/HindIII 片段 1% 6-well agarose gel DNA 标准分子量 （λMr, 0.5 μg/μL） 方法步骤： 1） 取4 支微量离心管，依下表加入DNA, TE-8.0 及追踪染剂 （μL）

Restriction enzymes are expensive ($40 to $200 a vial): keep the enzymes at -20℃. Plan your digests to be small and convenient. The digest i

Prepare a 100 µl reaction mixture containing the DNA of interest in the appropriate 1X restriction enzyme buffer. Divide the reaction mixtur

1. Cut DNA with 5'- and 3'- overhangs, gel check, phenol-Sevag extract and NaOAc/EtOH ppt. 2. Prepare one S1 nuclease tube (on ice) for eac

Restriction enzyme digestions are performed by incubating double-stranded DNA molecules with an appropriate amount of restriction enzyme, in