构建人VH基因节段文库
[器材和试剂]
● PCR试剂和设备
● 自pHENl中天然scFv文库制备的scFv基因文库模板DNA（单链和双链DNA 10ng/ul）
● Genecle"n试剂盒（Qbiogene）
● PVH3FoR1引物： 5'-TCG CGC GCA GTA ATA CAC GGC CGT GTC-3'
● PVH3FORl引物： 5'-TCG CGC GCA GTA ATA CAC AGC CGT GTC CTC-3'
● PVlJ5FORl引物： 5'-TCG CGC GCA GTA ATA CAT GGC GGT GTC CGA-3,
● LMB3引物
[方法]
1、配制3个各自独立的50ul PCR反应混合液，包含：
● 水，35.5u1
● 20×dNTP,2.5ul
● 10×Vent聚合酶缓冲液，5.0ul
● LMB3引物（10pmol/ul），2.5ul
● FORWARD引物 （10pmol/u1），2.5ul
● scFv基因模板DNA（10ng），1.0u1
● VentDNA聚合酶（2单位），1.0u1
2、在有加热盖的热循环仪内加热反应物到94℃，5分钟。
3、以94℃30秒、42℃30秒、72℃1分钟的条件共循环25次，扩增VH基因。
4、在1.5%琼脂糖胶上胶纯化VH基因文库并用Genecleall试剂盒提取DNA.将每种产物重悬于20ul水中。在1.5%琼脂糖胶上，与已知大小和浓度的标准对照品比较，测定DNA浓度。
