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植物RAPD(随机扩增多态性DNA)分析技术
RAPD(Randomly Amplified Polymorphic DNA),意为随机扩增多态性DNA,是利用PCR技术进行随机扩增,把扩增的DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳,根据DNA条带的多态性来反应模板DNA序列上的多态性。RAPD同AFLP、SSR等分子标记一样都基于PC
2010-03-24
直接原位PCR(In situ PCR)操作方法
原位PCR是原位杂交细胞定位和PCR的高灵敏度相结合的技术,使得靶基因检测有了极大的改进。此技术是在细胞(爬片、甩片或涂片)或组织(石蜡、冰冻切片)上直接对靶基因片段进行扩增,通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。 1.组织切片和细胞样品的制备 【试剂与配置】
2010-03-29
RAPD(randomly amplifiled polymorphic DNA,随机扩增的多态性DNA)
一、 原理 运用随机引物扩增寻找多态性DNA片段可作为分子标记。这种方法即为RAPD(randomly amplifiled polymorphic DNA,随机扩增的多态性DNA.)该RAPD技术建立于PCR基础上,它是利用一系列(通常数百个)不同的随机排列碱基顺序的寡聚核苷
2010-03-30
分子标记——AFLP原理和操作步骤
一、原理 AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增,然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳,多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接
2010-03-30
vWF III位点扩增片段长度多态性试验
【实验原理】 扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphisms,Amp-FLP)根据PCR技术原理,针对靶基因座的侧翼序列设计一对特异性引物,采用适当的PCR 反应体系和热循环条件,可扩增出该基因座等位基因。PCR 产物经电泳分
2010-04-03
限制性片段长度多态性(RFLP)分析
限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)分析技术是分子生物学的重要分析方法之一,用于检测DNA序列多态性。PCR-RFLP 是将PCR 技术、RFLP 分析与电泳方法联合应用,先将待测的靶DN
2010-04-03
PCR-SSP分析实验原理和步骤
PCR 序列特异性引物(sequence specific primer,SSP)分析法是使用能够特异识别特定等位基因的引物通过PCR 扩增检测序列多态性的方法,也称作等位基因特异性引物PCR 法。本实验是应用PCR-SSP 法检测MN 基因型。 [实验原理] 根据决定某等位
2010-04-03
多个短串联重复基因座的自动化检验
[实验原理] 在一个PCR 体系中同时扩增多个基因座的方法叫做复合扩增(Multiplexing PCR)。STR的复合扩增增加了单次检测的信息量,提高了个人识别率,同时可降低成本和检材的消耗,因此显示出重要的法医学应用价值。其基本原理就是利用基因座内等位基因长度的不同;扩增的
2010-07-19
PCR基因扩增
一、实验原理 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是一种体外核酸扩增系统,其原理类似DNA分子的天然复制过程,是将在待扩增的DNA片段和与其两侧互补的两个寡聚核苷酸引物,经变性、退火和延伸若干个循环后,DNA扩增 2n 倍。该技术已成为分
2010-04-05
基因表达的半定量PCR检测
实验目的: 以cDNA为模板,利用PCR技术制备目的基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)的大量拷贝,以便进行目的基因的克隆;此实验还包括PCR引物设计,PCR产物的琼脂糖电泳检测等内容。 实
2010-04-29
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