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SYBR Green Ⅰ荧光染料：是一种只与双链DNA小沟结合的染料，当它与DNA双链结合时，发出荧光；从DNA 双链上释放出来时，荧光信号急剧减弱。SYBR Green I 的最大吸收波长约为497nm，发射波长最大约为520nm。在PCR 反应体系中，加入过量SYBR 荧光染

一 引物的设计 引物的设计对于这个实验至关重要，因为real time pcr的检测灵敏度比较高，所以相应的对引物设计的要求就很高。普通的要求规则大家都知道，还有几点必须注意： 1，引物的错配率（引物错配形成引物二聚体，但是SYBR照样能嵌入进去，结果导致实验结果的误差很大，

引物的设计相对于普通的PCR来说，还是有一些更为严格的要求： 1、引物的退火温度要高，一般要在60度以上； 2、引物的产物大小不要太大，一般在80-250bp之间都可； 3、引物一般要设计在目的基因中跨内含子的位置，这样可以避免在存在DNA污染的情况下，对目的片断的额外的扩

Capucine Letertrea, Sylvie Perellea, Franc¸oise Dilassera, Khalil Ararb, Patrick Facha,* aAgence Franc¸aise de Se´curite´ Sanitaire des Ali

Kenneth J. Livak* and Thomas D. Schmittgen†,1 *Applied Biosystems, Foster City, California 94404; and †Department of Pharmaceutical Science

一、实验目的： 学习采用实时荧光PCR仪检测食品、化妆品等中的沙门氏菌(salmonella .spp)的特异检测。 二、实验原理： 试剂盒采用PCR 方法结合荧光探针的体外扩增和检测技术，适用于食品、卫生防疫、化妆品等沙门氏菌(salmonella .spp)的特异检测。

实时荧光定量PCR技术简介： PCR简介 荧光定量PCR技术原理 荧光化学物质简介 多重PCR与内参照基因 定量方法 定量PCR技术延伸 基因分型（SNP）检测 熔解曲线分析 什么是PCR？ Polymerase Chain Reaction (PCR)聚合酶

Katja Decker, Andreas Missel, Ken Dwyer, Janina Lehmann, Sabine Mueller, Jie Kang, and Dirk Loeffert QIAGEN GmbH, Max-Volmer-Strasse 4, 407

1. 实时PCR原理 对扩增产物进行可重复性的定量长期以来一直是科学家和研究者的目标。传统的方法需要对终产物进行凝胶电泳分析。这种方法可以确定目的产物和竞争产物的大小，估算纯度，计算条带强度。然而，所用扩增试剂和体系的变动会造成扩增的终产物的重复性有较大的变动，成为这种方法的主

Quantitative RT-PCR is an important step for the validation of expression data generated by cDNA microarray screening and other gene discove