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任亮，朱宝芹，张轶博，王海燕，李尘远，苏玉虹，巴彩凤 (锦州医学院辽宁省高校分子细胞生物学与新药开发重点实验室，辽宁锦州 121001) 【摘要】目的运用Primer Premier 5．0软件设计PCR引物，并且检验所设计引物的PCR扩增效率和特异性。方法运用Primer

自从1985年美国PE—Cetus公司的人类遗传研究室 Mullis等发明了具有划时代意义的聚合酶链反应PCP以来，PCR已经成为了分子生物学领域最基本也是最重要的技术手段之一。然而能否找到一对合适的核苷酸片段作为引物，使其有效地扩增模板DNA序列，无疑决定着PCR的成败。现在动

我们做实验室有时会用到别人已经用过的引物，但如何才能知道这个引物是否正确呢？我通常利用prime 5.0来验证引物。 下面我用常用的内参G3PDH将验证过程介绍如下： G3PDH的引物序列来自一片外文文献： 上游：AATGCATCCTGCACCACCAA 下游：GTAGC

Perhaps the most critical parameter for successful PCR is the design of Primers. All things being equal, a poorly designed primer can result

1. How to Reduce Primer Dimers in a LightCycler PCR Introduction Primer dimers are the product of nonspecific annealing and primer elongat

1．简介 寡聚核苷酸引物的选择，通常是整个扩增反应成功的关键。所选的引物序列将决定PCR产物的大小、位置、以及扩增区域的Tm值这个和扩增物产量有关的重要物理参数。好的引物设计可以避免背景和非特异产物的产生，甚至在RNA-PCR中也能识别cDNA或基因组模板。引物设计也极大的影响

1. 引物的长度一般为15-30 bp，常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA聚合酶进行反应。 2. 引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错配。引物3’端出现3个以上的连续碱基

1.引物是如何合成的？ 目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产，无论采用什么机器合成，合成的原理都相同，主要差别在于合成产率的高低，试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。申能博彩公司采用的合成仪主要机型为ABI3900高

作为目前最好、最专业的引物设计软件，Oligo的功能很强，在这里我们介绍它的一些主要功能，如：普通引物对的搜索、测序引物的设计、杂交探针的设计以及评估引物对质量等等。 在正式进行引物设计前，我们首先面临的一个任务就是向Oligo程序导入模板序列，根据不同的实验情况，导入模板有三

在核酸分子杂交、DNA序列测定和通过PCR放大DNA片段等实验中，都需要使用寡核苷酸作为探针或引物，而对这些反应的质量起最重要影响作用的，就是这些寡核苷酸探针或引物。用优化的寡核苷酸进行实验能够很快得到好的结果，而用不够合适的寡核苷酸时，常常得出似是而非的结果，不仅大大增加了后续