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随着分子生物学技术的发展，检测基因结构和突变的方法不断涌现.尤其是pCR技术问 世以后，各种与pCR相结合的基因检测技术进一步推动了基因研究的发展.如不对称pCR产物的直接测序、核糖核酸酶酶切法(Ribonuclease cleavage，RNAase)、限制性片段长度多态性分析

PCR常见问题分析及对策(无扩增产物、非特异性扩增、拖尾、假阳性) 问题1：无扩增产物 现象：正对照有条带，而样品则无 原因: 1. 模板:含有抑制物，含量低 2.Buffer对样品不合适 3.引物设计不当或者发生降解 4.反应条件：退火温度太高，延伸时间太短 对

PCR过程中如果没有找到最佳的扩增条件将会导致产生许多不确定的、不需要的产物，有时甚至没有目的产物；而在另一个极端，又可能没有扩增到任何产物。这时改变已知对引物－模板的忠实性和引物延伸有影响的诸多参数中的一两个，将会达到优化扩增的目的。其中最主要的优化变量包括 Mg2＋浓度、缓冲

吴敏生　王守才　戴景瑞 　　高等植物在其生命活动过程中，由于基因的选择性表达，决定了高等植物生命活动的多样性和连续性。在植物的生长、发育、衰老和死亡过程中，都有不同的基因起作用。因此，研究基因的选择性表达，掌握其对植物生命活动的调控，克隆新基因，是分子生物学的重要课题。 　　

PCR的假阳性问题深受重视，但我个人认为PCR假阴性问题相对于临床检测更为严重。其实PCR假阳性的问题是比较单纯的，一般仅涉及污染和引物的非特异性问题。而污染可以通过严格的实验室管理，合理的环境设置，以及加入UNG酶抗污染基本可以解决，而引物的非特异性问题基本属于厂家试剂质量问题

1)如果没有回收到目的片段，还需要作什么对照实验？ A）涂布未转化的感受态细胞。 如有菌落，表明氨苄失效，或污染上带有氨苄抗型的质粒，或产生氨苄抗型的菌落。 B）转化完整质粒，计算菌落生长数，测定转化效率。 例如，将 1ug/ul质粒1:100稀释,1ul用于100ul感

Troubleshooting for PCR and multiplex PCR Troubleshooting discussion is based on the PCR protocol as described in the table below. All reac

Jean Peccoud and Christine Jacob INTRODUCTION Quantitative applications of the Polymerase Chain Reaction (PCR), also known as Quantitative

Materials: sterile water 10X amplification buffer with 15mM MgCl2 -10 mM dNTP 50 μM oligonucleotide primer 1 50 μM oligonucleotide prim

A commonly used PCR buffer, includes only KCl, Tris and MgCl2(for example,Perkin Elmer Cetus);a somewhat more complex buffer was previously