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增加PCR的特异性 一、primers design （一）理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的一些条件 1、足够长，18-24bp，以保证特异性.当然不是说越长越好，太长的引物同样会降低特异性，并且降低产量。 2、GC%： 40%~~~~

1、引物 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板 DNA在体外大量扩增。 设计引物应遵循以下原则： 　　①引物长度： 15-30bp

为了对以个特定序列进行PCR做重复检测,需要三个不同的区域,每一个区域的具体技术操作和试剂在下面详细列出. 1、样品准备区 这个区域专门用作样品的准备，在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采 取预防措施： 1）PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。

　　定量PCR（Polymerase Chain Reaction）技术有广义概念和狭义概念。广义概念的定量PCR技术是指以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行 PCR起始模板量的定量。 　　广义概念下的定量PCR技术可以分为五种类型： （1）外

　　聚合酶链反应即PCR技术，因为其对基因或特定核酸序列在短时间内的极大的扩增效率，已在感染性疾病、肿瘤、遗传病、寄生虫病、法医学、动植物和考古等的诊断和研究中得到了广泛的应用，并在某些方面几乎是难以替代的。但是，像自然界的任何事物一样，PCR也有其局限性，稍不注意，就很容易造成

带有校正功能的酶 包括克隆和效率分析，PCR产物表达或定点突变在内的PCR应用都需要高忠实性的PCR。Taq DNA聚合酶被看做是低忠实性的聚合酶，因为其缺少 3’到5’外切核酸酶（校正）活性。 使用带有3’到5’外切核酸酶活性的热稳定聚合酶可以提高忠实性。 但是这些聚合酶

一、兼并引物（Degenerate Primer）PCR 密码子具有兼并性，如表22-4，单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列是不精确的，但可以设计成对兼并引物，扩增所有编码已知顺序的核酸序列。用兼并引物时寡核苷酸中核苷酸序列可以改变，但核苷酸的数量应相同。兼并度越低，产物特异性

1.逆转录PCR(RT-PCR)用来扩增RNA的方法。 2.竞争逆转录PCR(competitive reverse transcription-polymerase chain rection C-RT-PCR)低丰度RNA定量的好方法。 3.多重PCR（multiples

PCR技术具有高度的特异性、选择性、灵敏性，而且快速、简便、易于自动化，因此在临床医学工作中受到广泛的重视及合理的应用。目前在我国许多基层医疗单位均已相继开展PCR研究用应用工作。PCR技术很简单，原理也很清楚，因此有条件的单位都能较顺利地上马，但毕竟PCR技术是一种新生事物，受

1.主体结构： 主体为彩钢板、铝合金型材。室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝，从而解决容易污染、积尘、不易清扫等问题。结构牢固，线条简明，美观大方，密封性好。 2.标准的三区分隔和气压调节： 将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增检测三个独立的实验区。整个区