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Nature of the Insert The cloning of PCR-amplified fragments into a linear vector is typically a rapid and efficient process. However, not a

PCR: We generally use 1-2 ul of starting paraffin microdissected DNA for each 50 ul DOP-PCR reaction. We assume that about 1 ug of product

In designing primers for PCR, the following steps/rules were tested and proven to be useful: 1,Length of individual primers between 18-24 b

早在1958年科学家分离出DNA聚合酶（ polymerase）后，就曾设想利用DNA聚合酶扩增大量DNA片段。但当时由于DNA测序较难，没有核苷酸合成技术及耐热性的DNA聚合酶没有得到分离等原因而没有发展起来。直到1985年，美国的Cetus人类 遗传实验室的年轻科学家Mull

PCR的假阳性问题是在PCR诞生之初就被深刻认识到了，同时由于造成假阳性的因素相对单一，因此假阳性并不是困惑检验工作的主要原因。如果一个项目只是阳性率高敏感性好的话，那么可以认为其阴性结果具备很高的可排除性，仍然有相当的临床适用价值。但PCR的假阴性在检验工作中仍很严重，并且用些

1、Marker选择标准 （1）应选择在目标片段大小附近ladder较密的marker，这样对目标片段大小的估计较准确。 （2）所选marker应能清楚反映目标片段的大小，且次要片段大小也能反映出来。如作酶切鉴定时，目的片段和切后载体片段最好能在同一个 marker中反映出来

1) In separate PCR reactions, amplify the 5' and 3' ends of the gene of interest with primers about 200 bases apart. Primer 2 should begin w

PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。因此，引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。 要设计引物首先要找到DNA序列的保守区。同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构。如这个区域单链能形成二级结构，就要避开它。如这一段不能

引物（primers) 引物是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。 引物的重要性 在整个PCR体系中， 引物占有十分重要的地位。PCR的特异性要求引物与靶DNA特异结合，不与其他非

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