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基因表达的检测有几种方法。经典的方法（仍然重要）是根据在细胞或生物体中 所观察到的生物化学或表型的变化来决定某一特定基因是否表达。随着大分子分离技 术的进步使得特异的基因产物或蛋白分子的识别和分离成为可能。随着重组DNA技术 的运用，现在有可能检测．分析任何基因的转录产物。目前有

RT-PCR定义： 是指对组织或细胞的总RNA进行抽提，把RNA反转录为cDNA，然后设计目的基因引物进行PCR，琼脂糖电泳并数码拍照，分析电泳条带灰度值，判断目的基因mRNA转录水平的相对量的变化。 RT-PCR流程简介 一、抽提RNA： 1、防止RNA酶污染 180

1.SYBR Green I： 一种DNA结合染料，能非特异性地与双链DNA结合，结合后发出荧光，价格便宜，但因无特异性，易受到非特异性扩增和引物二聚体地的影响，是定量结果不可靠。可用融解曲线分析区分特异性和非特异性扩增，引物的设计和反应条件的优化对消除非特异性荧光有很大帮助。

H. Simmler and H. Singpiel Acconovis GmbH Lindenhofstr. 42-44 68163 Mannheim, Germany eMail: simmler@acconovis.com R. M¨anner Universi

核酸的凝胶电泳 •扩增原理 •分子杂交 •测序 核酸的凝胶电泳 它是一种分析鉴定重组DNA分子及蛋白质与核酸相互作用的重要实验手段，同时也是分子生物学研究方法的技术基础。 基本原理 带有负电荷的DNA或RNA核苷酸链，依靠无反应活性的稳定的介质（琼脂糖凝胶和聚丙烯酰

1. 将天蓝色链霉菌库斯质粒转化进入大肠杆菌BW25113/pIJ790*菌株中，此步可用常规的CaCl2 法。（pIJ790带有cat基因和对温度敏感的复制区，培养时温度要严格控制在30゜C以下） 2. 培养含库斯质粒的BW25113/pIJ790菌株：从平板上挑取大肠杆菌单

酶寡核苷酸序列切割率%2 hr20 hrNde ICCATATGGCCCATATGGGCGCCATATGGCGGGGTTTCATATGAAACCCGGAATTCCATATGGAATTCCGGGAATTCCATATGGAATTCCC000075750000>90>90Nhe IGG

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PCR检测的质量控制（实验仪器、试验试剂与耗材和人员操作）随着兽医防疫工作重要性的逐步提高，PCR检测技术已被兽医工作者比较广泛认可，已经从实验室研究走进了临床应用阶段。如何提高PCR检测质量，已成为实验室技术人员不可回避的一个问题，它直接影响实验室检测结果的可信度和兽医防疫工作

1、PCR reaction system: 25 ng linear template (~6.5 kb) 50 pmol each primer 100 pmol each dNTP 1X Promega Taq buffer (no Mg2+) 1.5 mM Mg