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Please contact Center for Plant Genomics (CPG) facility manager Hailing Jin (hljin@iastate.edu) regarding questions or corrections. REVERSE

（一）、仪器设备 英国Thermo Hybaid原位PCR仪。 （二）、操作流程 1、原位PCR步骤 1）预处理： （1）切片常规脱蜡； （2）0.2mol/L HCl处理10min； （3）5μg/ml蛋白酶K消化组织37℃10min； （4）Nase消化组织3

张驰宇1 ,2) , 　张高红1 ,2) , 　杨　敏1) , 　贲昆龙1) 3 (1) 中国科学院昆明动物研究所分子与细胞免疫学实验室,昆明　650223 ;2) 中国科学院研究生院,北京　100039) 摘要　为建立一种新的 SYBR green Ⅰ实时定量RT-PCR

1)什么是Access RT-PCR？ 2)什么是Access RT-PCR系统？ 3)总RNA能否作为模板，是否一定需要 poly(A)+RNA? 4)使用Access RT-PCR系统需要的RNA的量是多少？ 5)同一般常用方法相比较，Access RT-PCR系统有

1、高质量RNA 成功的cDNA合成来自高质量的RNA。高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂，如EDTA或SDS。RNA的质量决定了你能够转录到cDNA上的序列信息量的最大值。一般不必使用oligo(dT)选择性分离 poly(A)+RNA。不管起始模板是总RN

我做的是人VI 型胶原蛋白α1 链的克隆 流程和实验结果如下，给做RT-PCR 的朋友一点参考。 首先引物设计 引物设计有3 条基本原则：首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA 聚合反应(即

A frequent cause of concern among investigators performing quantitative RT-PCR is inaccurate data due to DNA contamination in RNA preparatio

I. Assay Development A. Sequence selection B. Primer & Probe Selection C. Quencher dye and internal reference D. Assay Validation II. A

This protocol describes one-step real time quantitative reverse transcription PCR to quantify relative levels of a particular mRNA sequence

在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响