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动物染色体标本(cell chromosome)的制备与观察
实验原理 凡细胞处于活跃增殖状态,或者经过各种处理后,细胞就可进入分裂的任何动物组织,均可用于染色体分析。在正常动物体内,骨髓是处于不断分裂的组织之一。给动物注射一定剂量的秋水仙碱即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期,然后采用常规空气干燥法制备染色体,即可得到大量可分析的染色体标
2010-03-28
线粒体(mitochondria)的分离与观察
一、实验目的 1. 初步掌握用差速离心法分离大鼠肝细胞线粒体的方法。 2. 学习并掌握高速离心机和匀浆器的使用方法。 二、实验原理 线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化,并通过偶联磷酸
2010-04-01
细胞、细胞器及组分的分离与观察
叶绿体的分离与荧光观察 一、实验目的 了解叶绿体分离的一般原理和方法,并熟悉应用荧光显微镜方法观察叶绿体荧光现象。 二、实验原理 叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器,能发生特有的能量转换。利用低速离心机可以分离叶绿体,其分离在等渗溶液(0.35mol/L氯化钠或0.4mo
2010-04-06
人癌细胞染色体制备及观察
一、实验目的 学习人类染色体制备的常规方法,了解人癌细胞染色体及其变异。 二、实验原理 目前大多数癌症都建立了相应的细胞株或细胞系,体外培养的癌细胞多属于连续的周期细胞,可以用来制备染色体。国内外制备动物和人类染色体的常规方法是空气干燥法,该方法的关键包括: 1.秋水仙素
2010-04-06
人和哺乳动物原代细胞的蛋白质抽提步骤
一、培养的贴壁原代细胞的蛋白质抽提基本步骤 1、从贴壁细胞培养瓶中小心倾去培养液。 2、预冷的1×PBS(pH 7.4)清洗贴壁的细胞2次,小心倾去PBS。 3、蛋白质抽提试剂(1ml抽提试剂中加入5μl蛋白酶抑制剂混合液\5μlPMSF和5μl磷酸酶混合液等等)。 4、
2010-06-21
人外周血染色体制备和体外培养细胞的染色体标本制备
一、 人外周血染色体制备 1. 实验原理 人的外周血淋巴细胞培养方法是1960年由Moorhead 提出来的。正常情况下,人外周血小淋巴细胞都处在G1期(或G0期),但在体外给予一定的条件,进行培养,经72 h就可获得大量的有丝分裂细胞。这种取材简易、用血量少的培养方法已被广泛
2010-07-28
小鼠骨髓的染色体制备
1. 实验原理 小鼠骨髓细胞有高度的分裂活性,并且数量非常多,因此不必进行体外培养,可直接观察到分裂期细胞。处于分裂期的细胞经秋水仙素处理,阻断纺锤丝的形成,使细胞分裂停止于中期,此时染色体达到最大收缩,具有典型的形态。低渗处理使细胞破裂,便于染色体分散。该方法在临床上多用于白血
2010-07-28
细胞凋亡检测方法总览(早期检测、晚期检测和mRNA水平)
细胞凋亡的检测方法,从大类上还可以分为早期检测、晚期检测和mRNA水平的检测。 一、早期检测 1、PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测 2、细胞内氧化还原状态改变的检测 3、细胞色素C的定位检测 4、线粒体膜电位变化的检测 二、 晚期检测 1、TUNEL 2、L
2010-07-19
细胞凋亡的检测方法综述
一、形态学检测 (一)光学显微镜和倒置显微镜 1、未染色细胞 凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。 2、染色细胞 常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化,核膜裂解、染色质分
2010-01-31
Apoptosis:Miniassay
1) Aliquot 5 × 106 total cells in 5-8 ml 2% media. 2) Add 30 µl 3H-thymidine. 3) Incubate for approximately 16 hours under normal growth c
2010-02-04
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