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胸腹水染色体标本制备
一、原理 某些肿瘤细胞可脱落入胸腹水中,并继续生长、增值。因此,由胸腹水细胞可制备较好的染色体标本。胸腹水细胞染色体分析对恶性肿瘤具有辅助诊断的价值。如分裂相多,异倍性,有结构畸变,常支持阳性诊断。 二、用品和试剂 同外周血染色体制备。 三、操作步骤 1. 新鲜胸腹水2
2010-02-20
细胞/组织裂解液的制备
1. 溶液准备 2×样品缓冲液:130mM Tris-HCl ( pH8.0 ) , 20% ( v/v ) 甘油 , 4.6% ( w/v ) SDS , 0.02% 溴酚蓝 , 2%DTT PBS ( pH7.4 ) :10mM Na2HPO4,1.8mM KH2PO4
2010-02-20
细胞裂解方法:化学裂解、酶裂解和机械裂解
裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解。化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法,通常会很少使DNA 断裂。这两种方法(包括SDS 和溶菌酶处理等)提取纯化DNA中常用的方法。机械裂解可以更均一的裂解细胞,同化学裂解相比,机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性。机械处理可以更剧烈和
2010-02-20
细胞凋亡提取DNA ladder的操作规程(Apoptosis-DNA ladder Assay )
Apoptosis-DNA ladder Assay 1. Collect culture media, add 1 ml of trypsin to cell mono1ayer on 100-mmol/L dishes, scrape the cells, harvest
2010-07-19
细胞破碎(clasmatosis)的方法
不同的细胞器分离的方法是不同的,因此随之而然的破碎细胞的方法也是有差异的。具体如下: 一、细胞器的分离:制备某种生物大分子时,往往需要采用细胞中某一部分为材料;或者为了纯化某一特定细胞器上的生物大分子,通常破碎细胞后,先分离各组分,以防干扰,这对制备—些高难度和高纯度的生物大分
2010-02-20
各种细胞裂解液的功用(SDS,NP-40,TritonX-100)
SDS,NP-40,TritonX-100这三种去垢剂的作用是不同的,或者说作用力量强弱不同。 SDS属于离子型去垢剂,最厉害,基本可以把细胞完全破掉,DNA会释放出来,裂解液变得很粘稠。 NP-40是很温和的去垢剂,1%浓度的基本可以破坏掉胞膜,而对核膜破坏的作用弱,结合特
2010-02-20
不用Trizol裂解细胞提取RNA的方法
1、方法一 试剂: (1)变性液组成:25 g异硫氰酸胍溶于33 ml CSB中(42 mmol/L pH4.0乙酸钠、0.83%十二烷基肌氨酸钠、0.2 mmol/L β-巯基乙醇),65 ℃溶解,过滤灭菌,4 ℃预冷。 (2)酸性酚配制:55 ℃时,500 g酚溶入50
2010-02-20
植物(动物)细胞核差速离心分离
线粒体和细胞核的制备与观察 利用细胞核与线粒体在一定介质中的沉降速度的差异,可采取分级差速离心的方法,将细胞核与线粒体逐级分离出来。(差速离心技术) 线粒体是真核细胞特有的进行能量转换的重要细胞器。将动植物组织制成匀浆,在适当的悬浮介质中差速离心法可以分离细胞线粒体。在一定的
2010-02-21
细胞器分离和细胞脱核技术
一、破碎细胞的方法 1.杆状玻璃匀浆器法 •该匀浆器由一根端部表面磨砂的玻璃杆和一个内壁磨砂的玻璃套管组成。使用时,先用锋利的刀片把组织块切碎,然后把碎块加入套管中,用力使玻杆移动使组织细胞破碎。 2.高速组织捣碎机法 •使用时将4℃预冷的组织碎块或细胞悬液加入捣碎机的梅
2010-02-21
亚细胞结构的分离与鉴定
细胞由各种亚细胞结构组成。其重要的研究手段之一是分离纯化亚细胞组分,观察它们的结构或进行生化分析。离心技术是实现这一目标的基本手段。一般认为,转速为10~25Kr/min的离心机称为高速离心机;转速超过25Kr/min,离心力大于89Kg者称为超速离心机。目前超速离心机的最高转速
2010-02-21
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