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（一)层析技术 层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。可分为吸附层析法、分配层析法、离子交换层析法、凝胶层析法、亲和层析法、高效液相层析法等。 在层析法中，根据层析峰的位置及峰高或峰面积，可以定性及定量。层析法与光学、电学或电化学仪器连用，可检测出层析后各组分的

1、将高压的 PBS洗涤细胞瓶两次，弃PBS，倒置纸巾上吸干。 2、加入2 ml裂解液10×permeabilization buffer 2 ml。 3、放入冰箱里裂解，平放，拧紧盖子，置摇床半小时，200 转/min。 4、收集裂解液至 1.5 ml EP管，分两管，1

1ml RIPA buffer contains 35μl proteinase inhibitor(sigma cat no P8340) and 10μl phosphatase inhibitor RIPA buffer 最终浓度 1M Tris-HCl pH7.5)

1、取得完全无血液残留的肺脏： 实验前将大鼠全身血液放净，取得完全无血液残留的肺脏。 2、消化肺组织： 常用于细胞消化的酶有胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胶原酶。胰蛋白酶是最早用于消化、分离上皮细胞的酶，现在一般用损伤性小的弹性蛋白酶来替代胰蛋白酶。但这种酶却有活性不稳定，有效作用

Tris饱和苯酚（Tris saturated phenol）也称Tris平衡酚（Tris balanced phenol），是添加了抗氧化剂8-羟基喹啉，tris pH8.0充分平衡的苯酚，呈黄色。常用于DNA抽提和纯化等。 重蒸酚是苯酚在182度蒸馏的组分。 tris配制

（一）细胞总RNA的提取 1、6孔板细胞汇合度为90-100%时，取出无菌室，去其上清，用PBS洗两次后，每孔加TRIZOL试剂 1 ml，摇匀，无菌罩内消化3-5 min。 2、将各孔内消化好的细胞裂解液吸到一DEPC处理过的1.5 ml EP管中，加新开的氯仿0.2 ml

自身免疫性疾病主要特征是免疫系统在识别“自我”与“非我”时出现差错。尽管绝大多数自身免疫性T细胞在胸腺成熟过程中被调节分化后去除，但正常人体中总是带有部分自身反应性细胞。调节性T细胞是一种免疫调节细胞，它的作用是使机体能够通过调节外周免疫耐受来控制自身性疾病。人体中几种调节性细胞

1、高速组织捣碎： 将材料配成稀糊状液，放置于筒内约1/3体积，盖紧筒盖，将调速器先拨至最慢处，开动开关后，逐步加速至所需速度。此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等。 2、玻璃匀浆器匀浆： 先将剪碎的组织置于管中，再套入研杆来回研磨，上下移动，即可将细胞研碎，此法细胞破碎程度

一、细胞的裂解 1. HeLa cells were pelleted using a Sorvall centrifuge at 800 g for 10 min. 2. Cells were resuspended in lysis buffer [50 mM Tris-

一、原理 人外周血小淋巴细胞，通常都处在G1期（或G0期），一般情况下不进行分裂。如在培养液中加入植物血凝素（PHA），这种小淋巴细胞受到刺激可转化为淋巴母细胞，进入有丝分裂。短期培养后，经秋水仙素处理，低渗和固定，即可得到大量的有丝分裂细胞。人体的1ml外周血内一般含有约1×