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细胞凋亡又称程序性细胞死亡（PCD）,是细胞衰老自然死亡的主要方式之一，在机体中承担着重要的调控作用。它不仅在维持细胞群体数量的稳定、胚胎发育和免疫系统的克隆选择方面，而且在肿瘤发生、发展、抗肿瘤药物的治疗等方面具有十分重要的作用。 细胞凋亡是由基因编程控制的细胞主动参与的自杀

一、概述 细胞凋亡（apoptosis,Apo）是细胞增殖的反面，探讨的是细胞死亡的方式与机制。凋亡一词来源于希腊语。原指花瓣、叶片的脱落。自1972年Kerr首次提出细胞凋亡的概念以来，随着细胞生物学、免疫学和肿瘤学的研究发展，最近几年人们对细胞凋亡的重大理论意义和实际意义有

离体细胞与体内的细胞在营养代谢上是有区别的。机体内的细胞营养可受神经和激素等进行一系列的统一调节，而离体的细胞则不受其调节。离体培养细胞与体内细胞在营养要求上的主要差别如下：体外长期培养的细胞大多需要血浆、血清或胚胎浸出液，而这类培养基都可能含有微量的激素、维生素及必要的氨基酸，

CMC中效应细胞的制备： 1）用淋巴细胞分离液分离PBMC： 1、抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中，加2倍量磷酸盐（PBS）悬浮细胞。将此悬液小心加在淋巴细胞分离液上，400×g离心30分钟。 2、离心后红细胞在管底，PBMC在血浆和淋巴细胞分离液的交界面。收集PBMC，用

JAM检测技术是用于测定细胞死亡或凋亡的方法，如51Cr稀放法事基于细胞死亡往往伴随有细胞膜破裂及细胞质的释放，用51Cr或125I标记相关的靶细胞，与效应细胞共培养一定时间后，测定一定体积的培养上清中的放射性计数，以反映细胞损伤情况。而人们发现，细胞死亡的早期反应，细胞内DNA

（一）原理： 细胞凋亡是一个受基因调控的主动过程，bcl-2是抑制细胞凋亡的原癌基因，正常细胞的激活和发育过程中都有表达，但在发育成熟的细胞中，其表达降低，在低分化或癌变的细胞中，bcl-2高表达与肿瘤的发生、发展相关，bcl-2过量表达常导致对化疗药物的耐药性而阻止细胞凋亡，

DNA双链断裂与细胞死亡的关系更为密切。变压场凝胶电泳是采用将细胞包埋在低熔点琼脂糖凝胶中，通过蛋白酶、去污剂等渗入凝胶中融解细胞、去蛋白，纯化细胞DNA，再通过梯增电压进行琼脂糖凝胶电泳，结合DNA解旋荧光测定（FADU）法和检测DNA双链断裂。 1、主要试剂及配制方法：

单细胞凝胶电泳（SCGE）是在核算沉淀法和晕圈分析及弱碱性条件下的单细胞凝胶电泳等检测技术的基础上逐渐发展起来的一种在单细胞水平检测哺乳动物有核细胞DNA断裂的新技术。主要包括Olive等建立的测定DNA双链断裂中性微凝胶电泳技术和Singh等建立的测定DNA单链断裂的碱性微凝胶

1）原位缺口翻译检测裂解的DNA片段： 1、取106经促调亡物质处理的细胞，用1％ BSA-PBS洗涤细胞后加入0.1ml FITC标记的抗CD4或抗CD8单克隆抗体，4℃ 20分钟。用1％ BSA-PBS洗涤细胞。置冰上。 2、加入0.1ml 1％多聚甲醛，置冰上5分钟，加

（一）药物对肿瘤细胞的抑制效应的MTT法： 用培养基将肿瘤细胞调整至2 X108个/L，在96孔板中每孔加入100ul细胞悬液于37℃、5% CO2下培养过夜。 次日每孔加入不同浓度的药物100mg/L作为试验组，设加完全培养基不加药物的阴性对照，并用功能明确的药物为阳性对照