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聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳法
聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳法(Isoelectric Focusing-PAGE,IEF-PAGE)【实验原理】 等电聚焦法是一种特殊的聚丙烯酰胺凝胶电泳法。它的特点是在凝胶柱中加入两性电解质载体 -Ampholine,从而使凝胶柱上产生pH梯度。当向两性载体凝胶施加电场时,即
2010-04-09
不连续SDS-PAGE试剂和操作步骤
试剂 1、30%丙烯酰胺贮存液:29g丙烯酰胺和1g N,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于100ml热水中,验证其pH值不大于7.0。置棕色瓶中,4℃保存。 2、1.5mol/L Tris(pH8.8)溶液 3、10% SDS溶液 4、10%过硫酸铵:新鲜配制 5、 TEMED
2010-04-09
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验原理和操作步骤
实验原理: SDS-PAGE是对蛋白质进行量化,比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。 SDS是一种去垢剂,可与蛋白质的疏水部分相结合,破坏其折叠结构,并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中。SDS蛋白质复合物的长度与其分
2010-04-09
聚丙烯酰胺凝胶平板等电聚焦电泳测定蛋白质等电点
一、目的: 学习聚丙烯酰胺凝胶平板等电聚焦电泳测定蛋白质等电点的原理及方法。 二、原理: 等电点聚焦(isoelectric focusing, IEF)或简称电聚焦(electrofocusing),也曾称等电点分离聚焦电泳等。它是60年代中期出现的技术,克服了一般电泳易
2010-04-09
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量(垂直板型电泳)一、目的:1.学习SDS-PAGE测定蛋白质分子量的基本原理。 2.掌握垂直板型电泳的基本操作技术。 二、原理:由实验十五中已知,蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时,它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。
2010-04-09
聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白质(核黄素-TEMED聚合系统)
一、目的: 1.学习聚丙烯酰胺凝胶电泳原理。 2.掌握聚丙烯酰胺园盘电泳的操作技术。 3.比较醋酸纤维薄膜电泳与本法分离血清蛋白质的效果。 二、原理: (一)盘状电泳原理 盘状电泳是在区带电泳原理的基础上,以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物,采用电泳基质的不连续体系(即凝胶
2010-04-09
表达蛋白(Expressed protein)的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析
一、原理 细菌体中含有大量蛋白质,具有不同的电荷和分子量。强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用,通过加热使蛋白质解离,大量的SDS结合蛋白质,使其带相同密度的负电荷,在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)上,不同蛋白质的迁移率仅取决于分子量。采用考马斯亮兰快速染色,可及时观察电泳分离
2010-04-09
SDS-PAGE检测蛋白表达(protein expression)
一、材料与仪器 30%丙烯酰胺溶液;1.5mol/L Tris-HCl分离胶缓冲液,PH8.8;1.0mol/L Tris-HCl浓缩胶缓冲液,PH6.8;电泳缓冲液,PH8.3;10%SDS溶液;10%过硫酸铵溶液;样品处理液;染色液;脱色液;电泳玻璃板,电泳电源架,电泳槽,
2010-04-09
聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离血清蛋白(serum proteins)
[目的与原理] 掌握一种聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的方法,并用此法进一步分析血清蛋白的组成。 1、聚丙烯酰胺凝胶 聚丙烯酰胺是由丙烯酰胺(Acr)、NN′—甲叉双丙烯酰胺(Bis),在催化剂过硫酸铵(ammonium persulfate (NH4)2S2O8 简称AP
2010-04-09
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定IgG纯度
一)原 理 由于聚丙烯酰胺凝胶的浓度可以按要求配制,因此可以形成“连续系统”和“不连续系统”两种电泳系统。“不连续系统”最大的特点在于大大提高了样品分离的分辨率。这种电泳的主要特点是:(1)使用两种不同浓度的凝胶系统;(2)配制两种凝胶的缓冲溶液成分及pH不同,并且与电泳槽中
2010-04-09
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