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准备工作 （1）试管、试管架、滴管、吸管、小鼠固定架、玻璃瓶、玻璃皿、烧杯、橡皮头、剪刀、镊子、纱布、棉球、酒精灯、滴管、移液器、细胞计数器、生理盐水、PBS、双抗（青链霉素）、75%酒精、95%酒精、培养瓶（50ml，260ml）。 （2）BALB/C小鼠（4~5周龄，18

贴壁细胞细胞在培养瓶长成致密单层后，继续生长的空间不足，培养基中的营养成份也消耗较多，同时代谢废物也有较多堆积，需要分瓶培养，对细胞进行传代扩增。 对于贴壁不太紧的细胞如293，可以直接吹散后分瓶。而对于贴壁较紧的细胞如CHO，则需要以胰酶消化后再吹散分瓶，一般过程为 （以下操

各位做细胞培养的前辈后辈们，在细胞传代过程中，吹打是很关键的一步啊。能不能有效地快速把贴壁细胞吹打下来，关系到细胞后续的生长和实验啊。当吹打时产生很多泡沫的时候，很难在显微镜下观察清楚有没有完全把细胞吹打下来。 所以，希望大家都来交流一下各自的秘诀吧。如何能避免少起泡沫呢。

我养细胞1个月了，经历了失望-绝望-希望的过程，现在把学到的几点注意问题跟大家分享一下，希望能够对新手们稍有帮助，也欢迎高手指教： 1. 细胞不要过度消化，有些贴壁不牢的如293T，加入胰酶在台子里晃晃就可以了，不用放到温箱中； 2. 传代时，细胞分的稀了或者分的不均匀，形成

从孕17-18天的雌鼠的胎儿分离神经元细胞。孕雌鼠麻醉然后解剖，胎儿收集到HBSS-1中然后快速断头。剥离脑膜和白质后，大脑皮质收集入 HBSS-2 液中机械磨碎。皮质碎片移到有0.025%胰酶的HBSS-2液中37°C消化15分钟。胰酶消化后，细胞用含有10%胎牛血清的HBSS

少突胶质细胞来源于1-2 天的大鼠。断头后大鼠大脑收集到Ham’s F-12培养液中，移除脑膜和血管。皮质用机械匀浆进行匀浆然后将细胞悬液依次通过230μm和104μm尼龙网进行过滤。细胞通过1000rpm 7分钟离心进行收集，用添加12.5%胎牛血清的DMEM进行重悬细胞。最后

星形胶质细胞来源于2天的大鼠。断头后的大鼠大脑收集在含有11mM 碳酸氢钠，71mM葡萄糖和1%抗菌素的DMEM溶液中。移除脑膜，血管和白质。大脑皮层用机械分裂法进行匀浆，然后将细胞悬液经230μm，104μm 和73.3μm孔的铁丝网依次过滤。然后用700g 速度10分钟离心收

混合胶质细胞培养来源于1-2天的大鼠，如同星形胶质细胞培养，有轻微的改动。乳鼠断头后大脑收集在DMEM-Ham‘s F-12含有1%抗菌素的溶液中。除去脑膜，血管和白质后，用机械匀浆法将大脑皮层匀浆，然后将细胞悬液依次通过230μm和104μm孔径的钢网过滤，然后用离心法收集细胞

化学名：2-[4-（2-Hydroxyethyl）-1-piperazinyl] ethanesulfonic acid 中文名：羟乙基哌嗪乙硫磺酸 分子式：C8H18N2O4S 分子量：238.3 HEPES是一种非离子两性缓冲液，其在pH 7.2 - 7.4 范围内具

一、取材的基本要求 （1）取材要注意新鲜和保鲜 新鲜组织易于培养成功，取材时应尽量在4~6h内能制作成细胞，尽快入箱培养，若不能即时培养，应将组织浸泡于培养液内，于4℃存放。若组织块较大，应在清除表面血块、坏死组织、脂肪和结缔组织后，切碎于培养液内4℃存放，但时间不能超过24