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1、细胞培养所用溶液及其配制 1×RPMI1640及：按照产品说明配制，过滤除菌，4℃保存备用。 新生牛血清：56℃灭活30min，-20℃保存备用。 2×104U/ml青、链霉素液（双抗）：青链霉素各2×106 U溶于100ml灭菌双蒸水中，过滤除菌，分装，-20℃保存备

材料和方法 1、仪器： 手术器械一套，倒置显微镜（Leica）,CO2细胞孵育箱（Heraeus），超净工作台（苏州净化设备有限公司），扫描电子显微镜（Hitachi）。 2、主要试剂 DMEM高糖培养基（Gibco），胎牛血清（Hyclone，杭州四季青生物工程材料公司

实验步骤 采血： 需要在严格无菌条件下采血。肝素抗凝，室温保存，24hr-72hr转化效率高。也有保存更长时间，采血后不要将血液置冰箱中，长途运输也不要冷藏。 分离淋巴细胞： 采集血液4-5mL，与2mL1640（含1%双抗）在离心管内混合，然后缓慢沿管壁注入淋巴分离液（

准备的药品：pbs,199培养液，I型胶原酶（SIGMA）。 主要的器械：手术剪，镊子，止血钳，丝线，鞘管（PTCA用的动脉鞘的扩张管，6F或7F）。 首先，以PBS漂洗脐带1-2次，用剪刀将脐带剪成数段15CM左右长短（本人认为这个长度较为合适）。 之后，以止血钳提起一段

1、将切下的组织在手术台上请护士将标本放入低温生理盐水中（可不要动它），在手术完成时将标本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中带回实验室； 2、在超净台中将标本放入培养皿中，加入α-MEM洗涤； 3、获得组织切开，仔细辨认于关节反折处及增生的白色光滑的滑膜组织，附于关节软骨面

1、将静脉血20ｍl用ACD抗凝剂以容积比血：抗凝剂＝9：1抗凝处理 2、按血：分离液＝1：2注入国产淋巴细胞分离液上层，400g 20℃离心30分钟 3、交接层重浮于4倍体积的RPMI1640并通过离心法200g，10min洗三次 4、获得细胞可做分选或其他实验。 体会

材料 1、实验动物： 孕13d的昆明种二级小鼠。 2、主要试剂 主要试剂 来源 DMEM/F12 GIBCO rh-EGF peprotech rh-bFGF peprotech B-27 supplement GIBCO HEPES Sigma Trypsi

1.材料和方法 1.1 DMEM/F12条件培养液（亚硒酸钠40μg·L-1，腐胺16.2 mg·L-1，转铁蛋白100 mg·L-1，胰岛素234U·L-1，甲状腺素0.4μg·L-1，黄体酮0.62 mg·L-1，谷氨酰胺3g·L-1）。DMEM/F12培养基、小牛血清购自

溶液以及器材： 1、用RPMI-1640配I型胶原酶 0.1g/100ml 2、配三抗： 青霉素：100ku/L 链霉素：100ku/L 庆大霉素：100ku/L 3、培养液（M199＋ECGS[3ug/ml]＋15％胎牛血清）有EGF可以适当加点10ng/ml 4

一、摘要 目的：建立兔膀胱平滑肌细胞的分离、培养和鉴定的方法。方法：成年新西兰白兔两只（正常及梗阻各一只），采用酶法分离技术获得膀胱平滑肌细胞后于 10%小牛血清的DMEM中培养，观察细胞形态和扩增情况，用爬片染色、电镜、蛋白质α-肌动蛋白（α-actin）鉴定细胞类型。结果：