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RNA提取常见问题分析与解决
◆ 柱子堵塞: 1. 裂解或匀浆处理不彻底。减少样品使用量,增加裂解液用量,增加匀浆和裂解 时间。 2. 处理样品太多。 ◆ 得率低: 1. 裂解或匀浆处理不彻底。减少样品使用量,增加裂解液用量,增加匀浆和裂解时间。 2. 处理样品太多。请参考最大处理量。 3.
2010-04-20
小麦总RNA的提取实验原理及过程
实验目的 从黄化小麦苗中提取总RNA,可以为cDNA文库的构建做好准备。我们重点是要保证 RNA的完整性、产率、防止修饰和纯度,尤其是完整性、防止修饰和纯度。RNA是单链,2’OH是它的化学性质远比DNA活泼。所以,提取RNA颇为不易。加之RNA得不均一性,要将所有的RNA(r
2010-04-20
RNA快速提取一步法的建立
梁德勇 徐国恒 崔振中 王晓民 朱丽霞 韩济生 RNA是分子生物学研究的一个重要组成部分, 不论是cDNA文库的构建、RT-PCR、RNA序列分析、差异显示(mRNA differential display)、代表性差异分析 (representational Diffe
2010-04-20
异硫氰酸胍-酚法植物组织总RNA的制备
异硫氰酸胍—酚法提取RNA的原理如下:GIT与β-巯基乙醇共同作用抑制RNase的活性;GIT与 十二烷基肌氨酸钠 (Sarcosyl)作用使蛋白质变性,从而释放RNA;酸性条件下DNA极少发生解离,同蛋白质一起变性被离心下来,RNA则溶于上清中。该法所提 RNA纯度高完整性好较
2010-04-20
RNA的制备与分析
RNA: 主要由四种核糖核苷酸组成,即腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胞嘧啶(C)、尿嘧啶(U)。 天然的RNA并不象DNA那样呈双螺旋结构,而是单链线形分子。只有局部区域为双螺旋结构(约占RNA分子的50%)。 RNA分子中的核苷酸至少75个,多的可达数千个。 RNA的分类
2010-04-20
RNA提取试剂准备和操作步骤
准备试剂: 氯仿,异丙醇,75%乙醇(用DEPC处理过的水配制),无RNase的水. 1. 匀浆处理 a. 植物组织:以叶片RNA提取为例.取新鲜叶片在液氮中充分研磨或将 叶片剪碎后直接在TRNzol中研磨,研磨要迅速,最好不要超过1分钟. 大约100mg 叶片使用1 ml
2010-04-20
体液病毒DNA和病毒RNA小量制备试剂盒质检流程
1.抽检方式:从每批次生产的成品中抽取1‰样品进行检验,如该批次生产的产品少于1000盒,抽取一盒作性能检验。 2.检验要求: 2.1 体液病毒DNA/病毒RNA小量制备试剂盒组成:见产品说明书。 2.2组成核酸纯化试剂盒的塑料耗材的要求详见Q/WTJ- J01 00002
2010-08-12
植物总RNA的提取实验技术
一、实验目的 通过本实验学习从植物组织中提取RNA的方法 二、实验原理 RNA是一类极易降解的分子,要得到完整的 RNA,必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。高浓度强变性剂异硫氰酸胍,可溶解蛋白质,破坏细胞结构,使核蛋白与核酸分离,失活RNA
2010-04-20
植物RNA的分离(总RNA的分离和mRNA的分离)
1. 总RNA的分离 总RNA分离的方法很多,常采用的是异硫氰酸胍和b-巯基乙醇这两种RNase 抑制剂来抑制RNase的活性,同时,异硫氰酸胍与十二烷基肌氨酸钠(sarcosyl)共同作用可以破坏核蛋白复合体,使RNA顺利地解脱出来溶进缓冲液。由于RNA在碱性条件下不稳定,因
2010-04-20
RNA的提取与核酸的颜色反应
一. 目的 学习用浓盐法从酵母中提取RNA 掌握用等电点法沉淀RNA 观察核酸的颜色反应,了解核酸定性与定量测定的原理 熟练掌握普通离心机的使用方法 二. 原理 酵母繁殖快,生长周期短;其细胞质中的核酸大部分是RNA,而DNA很少;RNA提取液与菌体分离比较容易。
2010-04-20
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