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RNA抽提注意事项和经验指南
背景介绍 实验前方法/试剂的选择 问题解答 (外源性污染导致的问题不在本解答考虑中) RNA 抽提的“三大纪律八项注意” Rnase 污染的10大来源 RNase 和 DEPC 处理 RNA 抽提的10大窍门 提高 RNA 得率 经典抽提小技巧 特殊组织的抽提
2010-04-20
TRIzol法提取组织和细胞总RNA
(一)试剂准备 1 . TRIzol 试剂。 2 .氯仿 3 .异丙醇 4 . 75% 乙醇( DEPC H2O 配制) 5 . DEPC H2O (二)操作步骤 1 . 样品处理: (1)培养细胞:收获细胞 1-5×10 7 ,移入 1.5ml 离心管中,加入
2010-04-20
酵母核糖核酸(RNA)的提取、水解及组成成分的鉴定
原理 核酸在机体生命活动中具有重要意义,核酸可分为核糖核酸和脱氧核糖核酸两类。酵母中富含的核糖核酸在碱处理下成为可溶性的钠盐与蛋白质等其它成分分开,然后用乙醇提取。加酸水解核酸,可鉴定其组成成分。 用硫酸水解RNA时,可以生成磷酸、戊糖和碱基。各种成分以下列反应鉴定: (1
2010-04-20
RNA提取方法步骤及常见失败原因
目的 研究基因的表达和调控时,需要从组织或细胞中分离纯化RNA。RNA质量的高低常常影响RT- PCR、cDNA库构建和Northern Blot等分子生物学实验的成败。 主要试剂 Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞,抑制细胞释放出
2010-04-20
RNA提取实验方法流程
1、实验目的 提取人体细胞的总RNA和mRNA。 2、本实验所需试剂 1)、 CNE-2细胞及培养细胞的一系列条件, 2)、PBS缓冲液, TRIZOL试剂, 3)、DEPC处理过的水、大、中、小Tip及1.5 ml EP管, 4)、新的氯仿、异丙醇和乙醇, 5)、
2010-04-20
总RNA和基因组DNA同步纯化试剂盒
适合从动物细胞、动物组织或酵母菌中同步纯化总RNA 和基因组DNA纯化的总RNA , 适合用于Northern Blot、RT-PCR、体外翻译、Primer Extension、 S1 核酸酶作图、RNase 保护测定、 制备mRNA 和构建cDNA 文库等各种RNA 分
2010-04-20
地衣酚显色法测定RNA含量实验原理和操作步骤
【实验原理】 RNA与浓盐酸共热时发生降解,产生的戊糖又可转变为糠醛,在FeCl3或CuCl2催化下,糠醛与地衣酚(3,5—二羟基甲苯)反应形成绿色复合物,该产物在670nm处有最大吸收。当RNA浓度为20μg/m1~250μg/m1时,吸光度与 RNA浓度成正比。 【实验材
2010-04-20
植物病毒(plant viruses)RNA提取
大多植物病毒RNA为单链RNA,并且其极性与mRNA极性相同,植物病毒RNA提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获得满意结果。 一、材料 提纯TMV病毒液(10mg/ml)。 二、设备 冷冻台式离心机,低温真空干燥仪,电泳仪,电泳槽。 三、试剂 T
2010-04-20
动植物组织总RNA提取(Trizol法)和mRNA提取
一、材料 水稻叶片或小鼠肝组织。 二、设备 研钵,冷冻台式高速离心机,低温冰箱,冷冻真空干燥器,紫外检测仪,电泳仪,电泳槽。 易生物仪器库:http://www.ebioe.com/yp/product-list-42.html 易生物试剂库:http://ww
2010-04-20
哺乳动物细胞(mammalian cell)总RNA的分离
哺乳动物细胞总RNA的分离 细胞的裂解 提取步骤 注意事项 这一从培养的单层哺乳动物细胞中分离RNA的实验程序系为Favaloro 等(1980)所介绍程序的改良。该程序同样适用于从悬浮培养的哺乳动物细胞中或从易于分散成单个细胞的哺乳动物组织中分离 RNA。但不适用于
2010-04-20
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