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1. Dilute 2 ml of 4000 U/ml Collagenase D as follows: 1 ml into 9 ml HBSS/Ca2+/Mg2+ (=400U/ml) and 1 ml into 39 ml HBSS/Ca2+/Mg2+ (=100U/ml)

我们实验室最近一次的情况:我们前后从上海细胞中心买了三批细胞，细胞刚到的时候，观察均生长良好，密度适中，培养液清亮，也没有见小黑点，但是对细胞传代以后就陆续出现多少不等的小黑点，有时候在一夜之间暴长，给培养液加庆大霉素，也无济于事，对贴壁细胞用生理盐水及D-hanks液冲洗七遍后

一、污染的清除 　　培养细胞一经污染，多数较难处理。如果污染细胞价值不大，宜弃之；有细胞株留存的或可购置的，可在寻找原因后彻底消毒操作室，复苏或重新购置细胞，再培养。若污染细胞价值较大，又难于重新得到，可采取以下办法清除。 　　1、使用抗生素 　　抗生素对杀灭细菌较有效。联

器材与试剂 干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器。 具体步骤 一. 水的制备 细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水 二.PBS的制备与消毒(也可用于其它BSS，如：Hanks，

基本原理：本文分离单核细胞所用方法是Percoll非连续性密度梯度离心法，主要是根据不同细胞间密度的差别进行细胞分离。此法易操作，且使用通常的实验设备即可完成。 试剂与器材 ·外周血单个核细胞 ·PBS 1×和PBS 10×（无Ca2+、Mg2+），含0.5mM EDTA

血细胞的分离方法（中性粒细胞.嗜碱性粒细胞.外周淋巴细胞和单核细胞）血细胞由红细胞,白细胞,血小板等组成.实验中常用白细胞来做研究,如炎症渗出,细胞迁移,识别等都涉及到白细胞.白细胞又分为:粒细胞,淋巴细胞,单核细胞等.它们具有不同的功能.实验中常需要分离血细胞方能进行。 这里

养BMDC有好几个月了，看了2、3篇文献就开搞，发现论坛里还是有一些朋友养这个。就想开个专题讨论贴，请新手老手都上来谈谈经验或者问些问题。集思广益，大家相互促进下。 我在论坛里看到因为有朋友养DC看百把篇文献的，感到佩服又奇怪，就BMDC的培养我目前只知道有个经典版本和改良版本

大部分文献报导差速时间是2小时，但我个人做实验是遇到的情况说明2小时有些长了，已经有心肌细胞贴壁，而且把上层悬液吸出后转移，不知道为什么不好帖壁，成活率较低。我用的是0.125%胰酶分次消化。 我觉得影响心肌细胞贴壁的因素可以总结为如下几点： 1、所用老鼠的品系以及年龄 S

第一，盖玻片需要过酸，并且自来水、蒸馏水冲洗干净。两张或者以上的玻片很容易因为虹吸作用粘到一起，很容易冲不干净，很容易把两张完全重叠在一起的玻片当成一张，一定要看清楚，晾干片子最好是在消毒饭盒中进行，饭盒底面放上纱布，将玻片斜靠在饭盒侧壁，玻片正面不要接触纱布，否则会粘上毛毛的。

在细胞复苏过程中，有多次复苏失败，最终在查阅了相关技术积累了足够的复苏技能后复苏成功，现将细胞复苏的操作程序和注意事项总结如下，望能为同行提供些参考。 【材料】 1.常规细胞培养仪器设备、恒温水浴振荡器。 2.培养液（DMEM）胎牛血清（CBS）二甲基亚砜（DMSO）。