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混合淋巴细胞培养(mixed lymphocyte cultue，MLC)——3H-TdR掺入法一、目的及要求 　　1、熟悉混合淋巴细胞培养的原理； 　　2、掌握分离淋巴细胞的方法； 　　3、学习用同位素标记进行混合淋巴细胞培养的操作方法。 二、实验原理 混合淋巴细胞培

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树突细胞的分离-用小鼠骨髓前体细胞培养树突细胞 实验材料： 1. 6-7周龄小鼠（最好为雄性鼠，因为它们的骨头比较粗大；运输后需要休息至少5天；不要使用应激或脱水的老鼠） 2. 70%乙醇 3. 冰冷的以及室温的RPMI-1640培养基（如Life Te

实验材料： 1. 小鼠 2. HBSS洗涤缓冲液 3. MACS缓冲液 4. CD8a（Ly-2）磁珠 5. 结合缓冲液 6. biotin-抗CD25（7D4） 7. Streptavidin-PE 8. 抗PE磁

一、清洗 新采用和重新使用的培养器皿，都要严格清洗，以防各种有害物质对培养细胞损害。培养用的塑料器皿目前主要依靠进口，均已无菌密封包装，可直接使用。对于塑料瓶盖或胶塞等，可水中浸泡后用2％NaOH煮沸10～20min，自来水中浸泡和蒸馏水漂洗2～3次，晾干备用。细胞培养中的绝大

原代分离细胞培养是指从供体内取出组织后，经机械以及消化分离成单个细胞或单一型细胞群，使之在体外模拟人体生理环境，在无菌、适当温度和一定的营养条件下，生存、生长和繁殖。原代培养细胞常有不同的细胞成分，生长缓慢，但是更能代表所来源的组织细胞类型和表达组织的特异性特征。利用原代细胞培养

原代细胞培养成功以后，需要进行分离培养，否则细胞会因生存空间不足或密度过大，营养障碍，影响细胞生长。细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶中培养的过程称之为传代培养。传代细胞允许培养的细胞扩增(形成细胞株)，可以进行细胞克隆，易于保存，但可能丧失一些特殊的细胞和分化特征。传代细

1． 瘤细胞悬液接种 （1）无菌选取生长良好(有光泽，淡红色)瘤组织或对数生长期培养瘤细胞。 （2）在PBS中将瘤组织剪碎后用匀浆器研磨，经80～100目筛网过滤成细胞悬液。 （3）培养细胞应用PBS洗两遍。 （4）计数并调整细胞浓度至107～108／ml。 （5）常规

细胞接种或传代以后，实验者每天或至多间隔1～2d，要对细胞做常规性检查。观察细胞形态和生长情况以及培养的pH变化、有无污染等。根据细胞动态变化，做换液或传代处理，如发现异常情况应及时采取措施。 1. 细胞形态　生长状态良好的细胞，在一般显微镜下观察时可见，细胞透明度大、折光性强

培养细胞染色体显示法（传代培养细胞染色体显示法与人末梢血微量全血培养染色体显示法） 1）传代培养细胞染色体显示法： 1、培养细胞：取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80％～90％汇合单层培养细胞。 2、加秋水仙素：使用最终浓度为0.02～0.8微克/毫升营养液，温箱继续培