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单细胞凝胶电泳(SCGE)步骤
1、分离制备单细胞悬液: (1)体外培养的细胞株:用胰酶消化,最后用PBS悬浮吹打成单细胞悬液,细胞要计数,具体的量我前边已经说过。 (2)体内脏器细胞:处死动物,取出脏器,于Hanks’液中制备成单个细胞悬液。 2、胶板制备: (1)取100μl于45℃水浴中保温的0.
2010-02-17
细胞免疫荧光(immunofluorescence)操作步骤
1.细胞爬片; 2.4%多聚甲醛固定10min(固定细胞器用预冷的70%甲醇+30%丙酮); 3.PBS漂洗5min; 4.0.5% Triton 穿孔15min(丙酮固定法不用透化处理); 5.PBS漂洗2次,每次5min; 6.1%BSA封闭30min; 7.加入
2010-02-17
各荧光检测方法简介
各荧光检测方法简介(流式、荧光显微镜、共聚焦、全内反射与双光子) 很多细胞实验都要检测荧光,为方便大家选择合适的方法,在此简单说一下各种荧光检测方法的特点。不足的地方,欢迎大家补充: 1、流式,优点是速度快,非常适合做大数量统计,且样品只被检测一次,完全不用担心荧光淬灭的问题
2010-02-17
细胞中的微丝染色及微丝与细胞形态的实验观察
一、成纤维细胞微丝的染色及其对细胞松驰素B的反应 (一)原理 微丝普遍存在于多种细胞,对细胞的形状和运动有一定作用。细胞松驰素B可与微丝的亚单位肌动蛋白结合,从而破坏微丝,改变细胞的形状。 (二)细胞松驰素B处理成纤维细胞与染色观察 1、在平皿中有三张成纤维细胞贴壁生长的
2010-02-17
细胞器的光镜切片与电镜照片观察
一、三种细胞器的光镜切片 (一)高尔基复合体(Golgi Complex) 用镀银法染色的豚鼠脊神经节光镜切片:神经细胞因合成运输大量的蛋白质而含有发达的内质网和高尔基复合体,在低倍镜下观察,神经节的假单极细胞体被神经束分隔成群。神经细胞的胞体呈圆形或椭圆形。转换高倍镜观察,
2010-02-17
细胞化学染色(Cytochemical stains)分类技术
染色技术是分类白细胞的经典依据,但瑞氏染色这类形态学复合染色不能被自动分析所模拟。一般光学技术只能测到光强等量的参数,而不能测得波长等属性的参数。因此,自动分类就要求用单染来甄别。 过氧化氢是生物氧化还原反应的最重要氧化剂,在吞噬过程中广泛应用。因此,可以根据细胞过氧化氢酶染色
2010-02-17
细胞生长的ATP检测[荧光素酶法]
1、ATP反应液(Bio-Orbit)是粉末状混合物,含有荧光素、荧光素酶、0.5mmol醋酸镁、50mg BSA和0.1μmol无机焦磷酸。在4℃可以保存1个月。用前用10ml含2mmol/L EDTA的0.1mol/L pH7.75 Tris-醋酸缓冲液稀释。稀释液分装后可在
2010-02-17
细胞化学染色(Cytochemical stains)
细胞化学染色,是一种以形态为基础,结合运用化学或生物化学技术对血细胞内各种化学成分作定位、定性及半定量分析的方法。用于研究血细胞生理、病理和化学结构;临床上为某些血液病的诊断、鉴别诊断、疗效观察、预后监测和发病机制的探讨,提供重要依据。 血细胞化学染色的基本要求是在原位显示细胞
2010-02-17
细胞凋亡(apoptosis)的形态学检测
根据凋亡细胞固有的形态特征,人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。 1、光学显微镜和倒置显微镜 (1) 未染色细胞:凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体。 贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。 (2) 染色细胞:常用姬姆萨染色、
2010-02-19
Basic Method for Direct Immunofluorescence Labeling
immunofluorescence labeling; that is, the antibodies have the fluorescent dye attached. Direct labeling is simpler and quicker than indirect
2010-02-17
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