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本实验作为“大肠杆菌碱性磷酸单脂酶基因克隆、表达”的下游实验，通过对重组基因表达后的基因蛋白碱性磷酸单酯酶的提取、分离与纯化的实验操作，了解所涉及的生化技术中提取（细胞破碎）、分离（离心、盐析、过滤等）、复性（包涵体）、层析（凝胶与离子交换层析）、浓缩，与酶蛋白含量和酶活力检测、

一、试验目的 了解并掌握垂直板凝胶电泳的使用方法。 二、实验原理 聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳是以聚丙烯酰胺凝胶做支持物的一种区带电泳，由于此种凝胶具有分子筛的性质，所以本法对样品的分离作用，不仅决定于样品中各组分所带净电荷的多少，也与分子的大小有关。其次，聚丙烯酰胺凝胶电泳还

摘 要： 本文主要介绍了浊点萃取法、置换色谱法、亲和层析法、亲和色谱法、凝胶电泳、双水相萃取等蛋白质的最新分离纯化技术，综和近年来国内外的一些研究结果，结合实际应用的例子，分析了各种分离纯化方法的优点，同时指出其不足之处。文章最后展望了蛋白质分离纯化技术的发展趋势。 关 键 词

George P.Smith Division of Biological Sciences Tucker Hall (573)882-3344 Introduction to B-PER B-PER from Pierce Chemical Co.is a Tris-

Comments: T antigen (131-259)is an MBP-Hisx6-fusion protein constructed by Laura Mizoue (refer to the wisdom page for details on the constru

To concentrate proteins for analysis by SDS PAGE: If a small amount of protein is to be precipitated (less than a few micrograms),add Insul

SDS extraction followed by acetone precipitation – simple extraction protocol that does not require phenol.Recommended start protocol for wh

Buffers: Lysis Buffer (1 liter) 50 mM NaH2PO4 6.90g NaH2PO4.H2O (MW 137.99g/mol ) 300 mM NaCl(up to 2M)17.54gNaCl(MW 58.44)or 60ml 5M 10

Screen of GST-Fusion Protein Expression (pGEX system by Amersham: for check clones for expression of the desired fusion protein prior to la

Small scale fusion protein preparation Grow 5ml culture o/n in TB with amp. Add o/n culture to 50ml of TB amp and grow for 3 hours in 37℃