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盐析法(salting out method)分析测定血清白蛋白和球蛋白
[目的与原理] 掌握血清白蛋白和球蛋白测定的原理和方法,并用盐析法测定水产动物血清中白蛋白和球蛋白的含量。 血清中含有多种不同成分的蛋白质,主要为白蛋白和球蛋白。用盐析法沉淀血清中球蛋白,用双缩脲法测定上清液中白蛋白,同时测定血清总蛋白。血清球蛋白的量从两者的差值求得。 [
2010-04-04
蛋白质的性质实验原理和操作步骤
【目的和要求】 1. 学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法及其原理。 2. 了解蛋白质的两性解离性质。初步学会测定蛋白质等电点的方法。 3. 加深对蛋白质胶体分子稳定因素的认识,了解蛋白质的沉淀反应、变性作用的原理及其相互关系。 【实验原理】 (一) 蛋白质及氨基酸的
2010-04-04
离子交换法(ion exchange method)进行蛋白质纯化
一、仪器设备: 1.塑料管柱(Bio-Rad Econo-Pac column 732-1010, 1.5×12 cm) 2.分划收集器(fraction collector, 另需准备干净试管约60 支) 3.浓缩用离心机(低速5,000 rpm)及浓缩离心管Centri
2010-04-04
亲和层析法(aflinity chromatography)纯化蛋白质
若表现蛋白质上含有一段六个His 的片段,而亲和吸着剂胶体上接有镍离子,此蛋白质会专一性地结合到吸着胶体;洗去杂质后可用imidazole 溶离纯质蛋白质(Pharmacia 操作手册, Affinity Chromatography)。 一、仪器设备: 1.亲和层析管柱 (
2010-04-07
胶体过滤法(Gel filtration)蛋白质纯化
一、仪器设备: 1.色析管柱(Pharmacia C column, 1.6×100 cm)、铁架、铁夹及水平仪; 2.分划收集器(fraction collector, 需准备干净试管约100 支); 3.浓缩用离心机(低速5,000 rpm); 4.浓缩用离心管Cen
2010-04-04
包涵体(inclusion body)的纯化
包涵体是外源基因在原核细胞中表达时,尤其在大肠杆菌中高效表达时,形成的由膜包裹的高密度、不溶性蛋白质颗粒,在显微镜下观察时为高折射区,与胞质中其他成分有明显区别。包涵体形成是比较复杂的,与胞质内蛋白质生成速率有关,新生成的多肽浓度较高,无充足的时间进行折叠,从而形成非结晶、无定形
2010-04-04
血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定(凝胶层析法)
目的要求 1.了解蛋白质分离提纯的总体思路。 2.掌握盐析法、分子筛层析法、离子交换层析等实验原理及操作技术。 实验原理 血清中蛋白质按电泳法一般可分为五类:清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白,其中γ-球蛋白含量约占16%,100ml血清中约含1.
2010-04-04
胰蛋白酶的制备及活力的测定
目的要求 1.学习胰蛋白酶的纯化及其结晶的基本方法。 2.了解酶的活性与比活性的概念。 实验原理 胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中,在Ca2+的存在下,被肠激酶或有活性的胰蛋白酶自身激活,从肽链N端赖氨酸和异亮氨酸残基之间的肽键断开,失去一段六肽,分子构象发生
2010-04-04
盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白
原理 盘状聚丙烯酰胺凝胶,是由丙烯酰胺单体和少量的交联剂甲叉双丙烯酰胺,在催化剂的作用下聚合交联而成的三维网状结构的凝胶。 改变单体的浓度或单体与交联剂的比例,可以得到不同孔径的凝胶,将次凝胶灌装于直立的玻璃管中,再加样品,进行电泳分离,称为盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳。一般常采用
2010-04-04
醋酸纤维素薄膜(cellulose acetate film)分离血清蛋白
原理 采用醋酸纤维素薄膜为支持物的电泳方法,叫做醋酸纤维素薄膜电泳。醋酸纤维素,是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。将它溶于有机溶剂(如:丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等)后,涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构,有强渗透性,厚度约为120微米。
2010-04-04
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