• 凝胶层析法(凝胶过滤)脱盐和分离蛋白质

    原理 凡盐析所获得的粗制蛋白质(盐析得到的IgG)中均含有硫酸铵等盐类,这类将影响以后的纯化,所以纯化前均应除去,此过程称为“脱盐”(desalthing)。脱盐常用透析法和凝胶过滤法,这两种方法各有利弊。前者的优点是透析后析品终体积较小,但所需时间较长,且盐不易除尽;凝胶过滤
    2010-04-04
  • 牛乳中酪蛋白的制备

    实验原理: 牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质。其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。酪蛋白是白色、无味的物质。不溶于水、乙醇及有机溶剂,但溶于碱溶液。牛乳在pH4.7时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称乳清蛋白。乳清蛋白不同于酪蛋白,其粒子的水合能力强、分散性高,在乳中呈高分
    2010-04-05
  • 血清蛋白的分离——聚丙烯酰胺凝胶电泳法

    实验原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶为载体的一种区带电泳。该凝胶由丙烯酰胺(Acr)和交联剂N,N—甲叉双丙烯聚酰胺(Bis)聚合而成。聚丙烯酰胺凝胶电泳利用电泳和分子筛的双重作用分离物质。 Acr和Bis单独存在或混合在一起时是稳定的,但在具有自由基团体系时就能聚
    2010-04-05
  • 醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白

    实验原理 醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法。它具有简便、快速、样品用量少,应用范围广,分离清晰,没有吸附现象等优点。目前已广泛用于血清蛋白、脂蛋白、血红蛋白、糖蛋白、多肽、核酸、同工酶及其他生物大分子的分析检测,是医学和临床检验的常规技术。 本实验以醋酸纤
    2010-04-05
  • 包涵体(inclusion body)的纯化

    包涵体是外源基因在原核细胞中表达时,尤其在大肠杆菌中高效表达时,形成的由膜包裹的高密度、不溶性蛋白质颗粒,在显微镜下观察时为高折射区,与胞质中其他成分有明显区别。包涵体形成是比较复杂的,与胞质内蛋白质生成速率有关,新生成的多肽浓度较高,无充足的时间进行折叠,从而形成非结晶、无定形
    2010-04-07
  • 蛋白质纯化离子交换法(ion exchange method)

    各种蛋白质分子上可能带有不同的电性,经过离子交换管柱,可依其分子带电性的差异而分离开来 (Pharmacia 操作手册, Ion Exchange)。 仪器设备: 塑料管柱 (Bio-Rad Econo-Pac column 732-1010, 1.5×12 cm) 分划收
    2010-04-07
  • 蛋白质抽取(protein extraction)

    蛋白质在细菌中表现后,以反复的冷冻-解冻方法打破细胞,再用硫酸铵把蛋白质沉淀下来,此步骤可以去除大部份核酸、多醣、脂质等杂物。 仪器用具:恒温震荡培养箱37℃;高速冷冻离心机及离心管 (使用20,000 rpm离心陀)使用高速离心机要注意: 离心机及离心陀的温度要预冷完全,相对
    2010-04-07
  • 动物组织或细胞的蛋白质抽提步骤

    一、培养的贴壁动物细胞的蛋白质抽提步骤 1、从贴壁细胞培养瓶中小心倾去培养液。 2、预冷的PBS清洗贴壁的细胞2次,小心倾去PBS。 3、配置含抑制剂的蛋白质抽提试剂(1ml抽提试剂中加入5 μl蛋白酶抑制剂混合液,5 μl PMSF和5 μl磷酸酶混合液)。 4、细胞瓶
    2010-04-07
  • 大豆蛋白的提取与含量测定

    序言 蛋白质化学实验 蛋白质是一切生物体内重要的组成成份,蛋白质是由二十多种氨基酸以肽键相互联接而成的复杂的高分子化合物,溶于水时形成亲水胶体溶液。在酸碱和酶的作用下,蛋白质被水解成胶胨肽最后形成氨基酸。 蛋白质分子依靠氢键、盐键等副价键维持一定的空间构型。在各种物理化学因素
    2010-04-07
  • 微管蛋白的可溶性表达及纯化

    1、将重组质粒(BL21-2ß2或Rossatta-2ß2)的表达菌37℃摇培过夜后,1:20扩配(约需1h15m); 2、至OD600=0.5~0.7时(约1h15min~1h45min),在 15-(0.5-24,0.8-12);20-(0.5-12,0.8-8);28、2
    2010-04-07