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Before trying this method,try rapid protein prep which involves boiling yeast in SDS PAGE buffer 1.Grow 100 ml yeast to A600 ~1.0.If the ye

Protein表达是一个非常复杂的过程，因此很难预测表达的蛋白是否是可溶性的、包涵体形式还是部分降解的。为了预防各种可能的困难条件，在重组蛋白上导入两种Tag可以提供获得高纯度均质蛋白的灵活性。 蛋白含有两种不同亲和纯化Tag的重要原因： 纯化全长的蛋白 获得最高纯化的蛋白

一、前言 随着基因工程和细胞工程的发展，尽管传统的分离方法（如溶剂萃取技术）已在抗生素等物质的生产中广泛应用，并显示出优良的分离性能，但它难以提取和分离蛋白质。其主要原因有两个： 被分离对象——蛋白质等在40～50℃便不稳定，开始变性，而且绝大多数蛋白质都不溶于有机溶剂，若使

Grow a 2 ml culture,24 hr.at 30℃ in selective media When culture is ready,use it to inoculate about 55 ml (50 ml plus 5 for O.D.600 reading

1.Prepare 1 ml of packed beads by washing them 4 times in 10 ml of d-H2O in a 15 ml tube.The beads are Act.Ultrogel 22 AcA from IBF,and stor

一、目的： 1.学习琼脂糖聚胶电泳的原理和方法； 2.学习酶专一性染色原理及其应用； 3.掌握分离LDH同工酶的方法； 4.学习测定血清LDH总活力的原理与方法。 二、原理： 能催化同一反应而蛋白质结构不同的酶，称为同工酶。同工酶的蛋白结构既然有差别，它们的理化性质也

（一）原理 凡盐析所获得的粗制蛋白质（盐析得到的IgG）中均含有硫酸铵等盐类，这类将影响以后的纯化，所以纯化前均应除去，此过程称为“脱盐”（desalthing）。脱盐常用透析法和凝胶过滤法，这两种方法各有利弊。前者的优点是透析后析品终体积较小，但所需时间较长，且盐不易除尽；凝

（一）原理 离子交换是指液相中的离子与固定相上可解离基团的可逆交换反应。利用这个反应先将要分离的混合物在一定pH的溶液中解离，而后流经固定相，使之与固定相上的可解离基团进行离子交换，吸附于固定相上，凡不能进行交换吸附的成分，则流出层析柱外。再根据交换吸附于固定相上的各组分解离度

（一）原 理 蛋白质分子中含有酪氨酸、色氨酸及苯丙氨酸等残基，它们的结构中具有共轭双键，对紫外光有吸收作用，其最大值在280nm波长处。在此波长附近，蛋白质溶液的光吸收值与其含量（范围是0.1~1.0mg/ml）成正比，因此，280nm的吸光度可用作蛋白质的定量测定。若将已知不

（一）原 理 DNA是所有生物体的基本组成物质。真核生物DNA主要存在于细胞核中。制备DNA时应将细胞核膜打破方能释放出来。 细胞中的DNA和RNA分别与蛋白质相结合，形成脱氧核糖核蛋白及核糖核蛋白。在细胞破碎后，这两种核蛋白将混杂在一起。因此，要制备DNA首先要将这两种核蛋