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为了在同一标本上或同一细胞内同时检测是否存在两种或两种以上的靶核酸序列。可应用双重或多重原位杂交技术．即以两种或多种标记探针与靶核酸杂交。然后利用不同的检测手段分别显示各种靶核酸的存在和分布。该技术与免疫组织化学技术中的双重或多重标记相似，除了探针本身的特异性外，对结果的干扰主要

1. 固定 最好用4%的多聚甲醛固定液。对于冰冻切片，甲醛固定有时比冰冻丙酮好；但对于不同的组织和抗原，可选用不同的固定液。 有时候商品化的抗体会有比较适合而推荐的固定液，请于购置前注意说明书。 （1）BouinS固定液：饱和苦味酸750ml，甲醛250ml，冰醋酸50ml，

一、组织和细胞标本类型： （一） 组织标本类： 1、 石蜡切片：组织形态保存好 2、 冰冻切片：抗原性保存好 （二）细胞标本类： 1、组织印片 2、细胞培养片（细胞爬片） 3、细胞涂片 二、组织取材 1、脑组织和神经组织应采用灌注固定后，再进行后固定。 2、组织取

一、免疫组化（Immunohistochemistry,IHC/ Immunocytochemistry, ICC）原理 免疫组化是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 （荧光素、酶、金属离子、同位素） 显色来确定组织

1. 溶液准备： RIPA缓冲液：50mM Tris-HCl pH7.4 ，150mM NaCl ，1mM EDTA，1%Triton×100，1%去氧胆酸钠，0.1%SDS，1mM PMSF，1μg/ml 牛胰蛋白酶抑制剂 （ aprotinin ） ， 1μg/ml亮抑蛋白

1. 溶液准备： PBS （ pH7.4 ） :10mM Na2HPO4 ，1.8mM KH2PO4 ， 50mM NaCl ， 2.7mM KCl 封闭缓冲液：3%BSA-PBS 2. 程序： 1 ） 对石蜡切片进行脱蜡和水化：3×10min 二甲苯，5min 100%

（一）基本原理 Sano等（1992）率先利用基因工程的方法表达了A蛋白与链霉亲和素的嵌合体分子获得成功，建立了免疫PCR技术。这是一种新的抗原检测系统，利用细胞工程和基因工程技术，巧妙地将抗原抗体反应的特异性同PCR的敏感性相结合，通过构建单克隆抗体与重组核酸的嵌合体分子，使

滚动式循环放大（RCA）法是一种能够在恒温条件下，使标记有寡核苷酸探针（与组织细胞内的核苷酸无相关性）的抗体（特异性一抗或第二抗）与组织细胞内的抗原结合后，在DNA聚合酶的作用下，加入的寡核苷酸进行循环扩增，产生一条扩增的DNA序列拷贝产物，此时，标记在抗体上的寡核苷酸得到有效扩

一、原理 本法是由Geoghegan等（1978）首次应用金标探针检测B淋巴细胞表面抗原，将胶体金颗粒（大于20nm）标记在第二抗体或SPA分子上，制备成金标二抗。其原理是当特异性抗体与抗原结合后，用金标二抗或金标SPA与特异性抗体结合，形成抗原-抗体-金标抗体复合物，此时在光

一、柠檬酸钠法 1. 把玻片放在玻璃固定架上，再将架子放在盛有600ml的10mM柠檬酸钠（pH6.0）的容器中。 2. 微波中高火6-8min。 3. 室温冷却。 4. 用PBS洗涤3次，每次5min。 二、蛋白酶K法 1. 配制新鲜溶液： 25μl 20mg/m