• 单克隆抗体技术:细胞融合(cell fusion)

    融合剂 细胞融合的方法有物理法,如电融合、激光融合,化学融合法和生物融合法,如仙台病毒,此处例举化学融合法中的一种即聚乙二醇融合法。 聚乙二醇(PEG),在分子量为200~700时,呈无色、无臭的粘稠状液体,分子量大于1 000时,呈乳白色蜡状固体,能溶于水、乙醇及其他许多有
    2010-04-13
  • 淋巴细胞杂交瘤(hybridoma)单克隆抗体技术

      1975年,Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合,形成的杂交细胞既可产生抗体,又可无限增殖,从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元,也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。  
    2010-04-14
  • 单克隆抗体技术:细胞的选择

    脾细胞 1.材料 (1) 免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。 (2) 1640培养液 (3) 2.5%FCS-1640营养液 2.操作方法 (1) 拉颈或用CO2处死小白鼠。 (2) 将小鼠放于70%酒精中浸泡消毒,取出固定于板上,在无菌条件下取脾。 (3)
    2010-04-13
  • 单克隆抗体与常规抗血清的性质比较

    单克隆抗体与常规抗血清的性质比较 性 质 常规血清抗体 单克隆抗体 抗体含量 少 μg/ml 多 mg/ml 无关的Ig 多 少或几乎无 其它血清蛋白 有 少,培养物上清常有10%胎牛血清 Ag-Ab结合 免疫原的全部成分的全部抗原决定簇 免疫原中的
    2010-04-13
  • 杂交瘤细胞(hybridoma)的制备

    1. 骨髓瘤细胞的准备 选择生长状态良好的细胞,浑圆透亮,大小均一,边缘清晰,排列整齐,呈半致密分布。弃上清,以不完全培养基洗涤一次后,用10mL不完全培养基将骨髓瘤细胞(SP2/0)轻轻吹下。 2. 脾淋巴细胞的准备 a、取加强免疫后3天的小鼠,摘除眼球采血供分离阳性血清
    2010-04-13
  • 单克隆抗体的制备及应用

    摘要:本文着重讨论单克隆抗体的制备及其应用情况。迄今为止,单克隆抗体技术已经较为成熟和完善,并且在很多领域开始发挥着其不可替代的作用。 关键词:单克隆抗体 制备 应用 1975年Kohler和Milstein建立了淋巴细胞杂交瘤技术,使经绵羊红细胞(SRBC)免疫的小鼠脾细胞
    2010-04-14
  • 嵌合抗CD20Fab’抗体片段诱导Raji细胞的凋亡机制

    【摘要】目的探讨嵌合抗CD20抗体Fab’片段的抗肿瘤机制。方法应用MTT法检测Fab’片段对Raji细胞生长的抑制作用,用Annexin V-FITC和PI测定Fab’片段对Raji细胞凋亡的诱导作用,用RT-PCR和Western blot检测Raji细胞中bcl-2表达的变
    2010-04-14
  • 细胞融合(cell fusion)实验方案

    Fusion is an important procedure to produce monoclonal antibodies (MoAb). 一、Protocol 1、prepare the culture of myeloma cells and maintain t
    2010-04-14
  • 杂交瘤技术(hybridoma technique)的基本原理

    杂交瘤抗体技术的基本原理是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。这两种细胞分别是经抗原免疫的小鼠B细胞和小鼠骨髓瘤细胞。脾淋巴细胞的主要特征是它的抗体分泌功能和能够在选择培养基中生长(选择原理见后),小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖,即所谓永生性。在选择培养基的作
    2010-04-14
  • 杂交瘤细胞(hybridoma)和重组抗体(recombinant antibodies)

    在过去的二十五年里,利用杂交瘤细胞生产了成千上万的鼠单克隆抗体。人们用同样的技术从转基因鼠中克隆人类的抗体,并设计了全长型抗体和重组片段,它们可以被用于多种诊断和治疗。而且如果他们能在哺乳动物细胞,牛奶及植物中表达,就可以大量获得。 一个世纪以前,Paul Ehrlich提出了
    2010-04-14